IRAK-M單核苷酸多態(tài)性在哮喘發(fā)生中的作用及其轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制研究
發(fā)布時(shí)間：2020-12-09 16:28
目的:IL-1R相關(guān)激酶（IRAK）-M在哮喘氣道炎癥期間能夠調(diào)節(jié)肺臟免疫。然而,當(dāng)氣道炎癥持續(xù)時(shí)IRAK-M的調(diào)節(jié)作用不同。IRAK-M單核苷酸多態(tài)性與兒童哮喘發(fā)病相關(guān)已有報(bào)道,但目前仍缺乏IRAK-M單核苷酸多態(tài)性與成人哮喘關(guān)系的研究。在本研究中,我們將探討IRAK-M基因組區(qū)域單核苷酸多態(tài)性在中國(guó)北方漢族成人哮喘發(fā)生中的作用及其轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制。方法:（1）所有研究對(duì)象均來自于北京協(xié)和醫(yī)院或民航總醫(yī)院。哮喘診斷均由有經(jīng)驗(yàn)的經(jīng)過統(tǒng)一培訓(xùn)的呼吸內(nèi)科專家根據(jù)中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)哮喘學(xué)組制定的支氣管哮喘診斷標(biāo)準(zhǔn)作出。哮喘組共納入679例中國(guó)北方漢族成人哮喘患者,對(duì)照組共納入669例健康體檢者。所有患者均需完成詳細(xì)的病史采集、肺功能檢查、血常規(guī)檢查及血清IgE檢查,并采集外周靜脈血用于基因單核苷酸多態(tài)性檢測(cè)。選取IRAM-M基因組區(qū)域9個(gè)SNP,采用SNaPshot技術(shù)進(jìn)行外周血SNP分型,進(jìn)行基于群體的成人哮喘遺傳易感性分析;（2）應(yīng)用熒光定量PCR技術(shù),分析SNP位點(diǎn)rs1624395不同等位基因?qū)ο颊咄庵苎狪RAK-M mRNA表達(dá)水平的影響;（3）利用公共數(shù)據(jù)庫信息預(yù)測(cè)SNP位點(diǎn)...
【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校
【文章頁數(shù)】：83 頁
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【部分圖文】：
圖５．?多態(tài)性對(duì)哮喘患者外周血／見ｍＲＮＡ表達(dá)的影響??
０００?ｒｐｍ／分鐘離心２分鐘，收集濾液為回收產(chǎn)物。??ｃ－ＪｕｎＰＣＲ擴(kuò)增結(jié)果：以反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物ｃＤＮＡ為模板，ＰＣＲ擴(kuò)増條帶大小在９９６ｂｐ??處，與預(yù)期結(jié)果一致，如圖１所示：??圖１．人源ｃ－Ｊｕｎ基因ＰＣＲ電泳圖??２．１．４目的片段與線性化原核表達(dá)載體連接??將回收后的目的片段ｃ－Ｊｕｎ與雙酶切原核表達(dá)載體ｐＥＴ－２８ａ－Ｈｉｓ－ＭＢＰ進(jìn)行連接，??連接條件：１６°Ｃ連接４ｈ。??反應(yīng)體系?１０?ｐＬ：?２ｘＭＩＸ?５?｜ｉＬ；載體?１?ｐＬ；?ｃ－Ｊｕｎ?４?｜ａＬ，加滅菌水ｄｄ?Ｈ２０至?１０?叫。??４８??
ＰＣＲ反應(yīng)條件為：９５°Ｃ預(yù)變性１０分鐘，３５個(gè)循環(huán)（９４°Ｃ變性３０秒，６０°Ｃ退火３０??秒，７２°Ｃ延伸２分鐘），７２°Ｃ延伸１０分鐘，反應(yīng)結(jié)束后１％瓊脂糖凝膠檢測(cè)。??挑取單菌落進(jìn)行ＰＣＲ鑒定，擴(kuò)增條帶大小與預(yù)期結(jié)果一致，如圖２所示：??圖２．人源ｃ－Ｊｕｎ基因菌液ＰＣＲ鑒定結(jié)果??２．１．７序列測(cè)定與結(jié)果分析??原核表達(dá)載體ｐＥＴ－２８ａ－Ｈｉｓ－ＭＢＰ－ｃ－Ｊｕｎ菌液ＰＣＲ鑒定陽性菌株送至生工生物進(jìn)??行序列測(cè)定，測(cè)序結(jié)果與ＮＣＢＩ登陸序列進(jìn)行比對(duì)，比對(duì)結(jié)果顯示表達(dá)載體構(gòu)建成??功，序列比對(duì)結(jié)果說明ｐＥＴ－２８ａ－Ｈｉｓ－ＭＢＰ－ｃ－Ｊｕｎ原核表達(dá)載體構(gòu)建成功。??４９??
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]我國(guó)十城市支氣管哮喘控制和疾病管理及患者認(rèn)知水平的變化[J]. 林江濤,王文巧,周新,殷凱生,黃茂,劉春濤,王長(zhǎng)征,陳萍,袁雅冬,蔡紹曦,吳昌歸,李靖,林其昌,周建英,劉輝國(guó),顧玉海,黃信剛,孫德俊,楊曉紅,楊嵐,霍建民,陳卓昌,周瑋,蔣萍,唐華平,劉榮玉,張偉,陳一強(qiáng),黃奕江,劉曉菊,戴路明,葉賢偉,胡成平,張捷,許建英. 中華結(jié)核和呼吸雜志. 2018 (03)
[2]中國(guó)城鄉(xiāng)成年人群哮喘患病狀況及其影響因素[J]. 馬倩倩,楊土保. 中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2017(09)
[3]人類基因組計(jì)劃和人類基因組單體型圖計(jì)劃:口腔醫(yī)學(xué)的機(jī)遇、挑戰(zhàn)與對(duì)策思考[J]. 吳瑞卿,曾昕,王智. 華西口腔醫(yī)學(xué)雜志. 2010(04)
本文編號(hào)：2907149
【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校
【文章頁數(shù)】：83 頁
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【部分圖文】：
圖５．?多態(tài)性對(duì)哮喘患者外周血／見ｍＲＮＡ表達(dá)的影響??
０００?ｒｐｍ／分鐘離心２分鐘，收集濾液為回收產(chǎn)物。??ｃ－ＪｕｎＰＣＲ擴(kuò)增結(jié)果：以反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物ｃＤＮＡ為模板，ＰＣＲ擴(kuò)増條帶大小在９９６ｂｐ??處，與預(yù)期結(jié)果一致，如圖１所示：??圖１．人源ｃ－Ｊｕｎ基因ＰＣＲ電泳圖??２．１．４目的片段與線性化原核表達(dá)載體連接??將回收后的目的片段ｃ－Ｊｕｎ與雙酶切原核表達(dá)載體ｐＥＴ－２８ａ－Ｈｉｓ－ＭＢＰ進(jìn)行連接，??連接條件：１６°Ｃ連接４ｈ。??反應(yīng)體系?１０?ｐＬ：?２ｘＭＩＸ?５?｜ｉＬ；載體?１?ｐＬ；?ｃ－Ｊｕｎ?４?｜ａＬ，加滅菌水ｄｄ?Ｈ２０至?１０?叫。??４８??
ＰＣＲ反應(yīng)條件為：９５°Ｃ預(yù)變性１０分鐘，３５個(gè)循環(huán)（９４°Ｃ變性３０秒，６０°Ｃ退火３０??秒，７２°Ｃ延伸２分鐘），７２°Ｃ延伸１０分鐘，反應(yīng)結(jié)束后１％瓊脂糖凝膠檢測(cè)。??挑取單菌落進(jìn)行ＰＣＲ鑒定，擴(kuò)增條帶大小與預(yù)期結(jié)果一致，如圖２所示：??圖２．人源ｃ－Ｊｕｎ基因菌液ＰＣＲ鑒定結(jié)果??２．１．７序列測(cè)定與結(jié)果分析??原核表達(dá)載體ｐＥＴ－２８ａ－Ｈｉｓ－ＭＢＰ－ｃ－Ｊｕｎ菌液ＰＣＲ鑒定陽性菌株送至生工生物進(jìn)??行序列測(cè)定，測(cè)序結(jié)果與ＮＣＢＩ登陸序列進(jìn)行比對(duì)，比對(duì)結(jié)果顯示表達(dá)載體構(gòu)建成??功，序列比對(duì)結(jié)果說明ｐＥＴ－２８ａ－Ｈｉｓ－ＭＢＰ－ｃ－Ｊｕｎ原核表達(dá)載體構(gòu)建成功。??４９??
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]我國(guó)十城市支氣管哮喘控制和疾病管理及患者認(rèn)知水平的變化[J]. 林江濤,王文巧,周新,殷凱生,黃茂,劉春濤,王長(zhǎng)征,陳萍,袁雅冬,蔡紹曦,吳昌歸,李靖,林其昌,周建英,劉輝國(guó),顧玉海,黃信剛,孫德俊,楊曉紅,楊嵐,霍建民,陳卓昌,周瑋,蔣萍,唐華平,劉榮玉,張偉,陳一強(qiáng),黃奕江,劉曉菊,戴路明,葉賢偉,胡成平,張捷,許建英. 中華結(jié)核和呼吸雜志. 2018 (03)
[2]中國(guó)城鄉(xiāng)成年人群哮喘患病狀況及其影響因素[J]. 馬倩倩,楊土保. 中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2017(09)
[3]人類基因組計(jì)劃和人類基因組單體型圖計(jì)劃:口腔醫(yī)學(xué)的機(jī)遇、挑戰(zhàn)與對(duì)策思考[J]. 吳瑞卿,曾昕,王智. 華西口腔醫(yī)學(xué)雜志. 2010(04)
本文編號(hào)：2907149
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