發(fā)布時間：2020-12-07 03:43

　　腺苷酸環(huán)化酶3（AC3）基因突變引起的肥胖,是迄今為止發(fā)現(xiàn)的第一個單基因肥胖疾病。盡管大量的基因組關(guān)聯(lián)分析數(shù)據(jù)證明,人類AC3上存在多個與肥胖相關(guān)的SNP,但這些SNP位點是否對AC3的表達及功能有所貢獻尚未探明。CRISPR/Cas9技術(shù)可以進行單堿基編輯,因此本文在對人類AC3基因肥胖相關(guān)SNP位點進行生物信息學(xué)分析的基礎(chǔ)上,以293T細胞為主要實驗材料,利用CRISPR/Cas9技術(shù)對AC3基因上肥胖相關(guān)SNP位點進行編輯,探究SNP位點對AC3基因表達的影響及其機制:1、對人類AC3基因肥胖相關(guān)SNP位點進行生物信息學(xué)分析:1)對蛋白的翻譯后修飾位點以及3’UTR上miRNA結(jié)合位點進行預(yù)測分析,發(fā)現(xiàn)僅在exon1和exon17上的SNP位點可能發(fā)生磷酸化,且3’UTR上的SNP位點無miRNA結(jié)合;2)預(yù)測基因上SNP位點的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合情況,發(fā)現(xiàn)可能與EMX家族,OTX家族,KLF家族等轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合,為研究SNP調(diào)控AC3表達的機制奠定基礎(chǔ)。2、為研究exon13 SNP（rs2289092）,exon17 SNP（rs1127568）,3’UTR SNP（rs1044040... 

【文章來源】：河北大學(xué)河北省

【文章頁數(shù)】：104 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

腺苷酸環(huán)化酶3的結(jié)構(gòu)

圖 1-2 人類 AC3 基因上存在多個與肥胖相關(guān)的 SNP 位點Fig.1-2 Multiple obesity-related SNP sites on the human AC3 gene.3 CRISPR / Cas9 基因編輯技術(shù)及其應(yīng)用.3.1 CRISPR / Cas9 基因編輯技術(shù)簡介CRISPR/Cas9 最初在細菌和古生菌中作為獲得性免疫系統(tǒng)而被發(fā)現(xiàn)，通過作用于的外源遺傳物質(zhì)使其降解而達到免疫效果[45-47]。CRISPR/Cas9 系統(tǒng)主要由 Cas9 核和一段短的引導(dǎo) RNA（sgRNA，要求 3’端必須含有 PAM 序列）組成基因編輯系統(tǒng)圖 1-3 所示。CRISPR/Cas9 基因編輯系統(tǒng)在 gRNA 的引導(dǎo)下，Cas9（WT 的 Cas9，spCas9）蛋靶基因結(jié)合并進行切割引起 DNA 雙鏈斷裂（DSB）[48]，引發(fā)細胞內(nèi)的非同源性末合(Non-homologous end joining,NHEJ)或同源介導(dǎo)的雙鏈 DNA 修復(fù)（Homoloirected repair，HDR）途徑[49]。在進行同源重組時，NHEJ 途徑在進行修復(fù)時很容易

圖 1-3 CRISPR / Cas9 基因編輯原理圖Fig.1-3 CRISPR / Cas9 gene editing principle（引自 https://image.so.com/crispr+cas9 原理圖）/ Cas9 單堿基編輯的應(yīng)用 2/3 的人類遺傳性疾病是由于單個堿基發(fā)生改變而病。單堿基疾病是由于基因水平上發(fā)生突變引起的從基因上改變堿基序列的基因治療成為單堿基疾只是全基因組上的一對堿基發(fā)生了突變，要對其進確的基因編輯效率，而以往的基因編輯技術(shù)都不足于造成單堿基疾病治療舉步維艱的局面。CRISPR醫(yī)學(xué)的研究，帶來了基因治療的曙光[51,52]。技術(shù)可以用于進行單堿基編輯實驗已經(jīng)在眾多研行單堿基編輯可以在體外進行致病性單堿基突變


本文編號：2902553