第一部分體外分析OPG對肝細(xì)胞糖代謝的影響目的:在體外探索OPG（骨保護(hù)素）對肝細(xì)胞糖代謝及胰島素信號通路的作用方法:構(gòu)建OPG過表達(dá)及抑制腺病毒,并通過感染肝模型細(xì)胞hepal1-6和L02細(xì)胞系,采用高糖高脂F(xiàn)FAs或葡萄糖胺Glc N造胰島素抵抗模型。通過過碘酸希夫染色檢測細(xì)胞中糖原含量變化。用試劑盒定量檢測其糖原含量。用2-NBDG試劑盒檢測細(xì)胞糖攝取能力。采用western blot技術(shù)檢測糖代謝相關(guān)基因p-Ins R,t-Ins R,p-AKT,t-AKT,PEPCK,G6Pase蛋白水平的表達(dá)情況。結(jié)果:成功構(gòu)建OPG過表達(dá)及抑制病毒并感染細(xì)胞,并建立胰島素抵抗細(xì)胞模型。糖原染色及定量檢測結(jié)果均顯示OPG能抑制糖原合成。且OPG過表達(dá)處理后細(xì)胞糖攝取能力降低。western blot結(jié)果中,在胰島素抵抗情況下,OPG過表達(dá)使PEPCK及G6Pase水平升高,并且胰島素信號通路中關(guān)鍵因子p-AKT明顯降低,而p-Ins R水平卻無變化。結(jié)論:OPG能夠調(diào)控肝細(xì)胞的糖代謝,且其可能是通過作用于Ins R的下游分子從而來調(diào)控糖代謝關(guān)鍵信號分子AKT的活性。第二部分OPG基因敲除... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：117 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

蛋白質(zhì)濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線

重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文染 OPG 過表達(dá)腺病毒后 OPG 表達(dá)增加（A.空載和 OPG 過表達(dá)腺病毒熒光毒感染后 OPG 的 mRNA 表達(dá) C.病毒感染后 OPG 的蛋白表達(dá)）(P < 0.05)e 1.2 Infected with OPG overexpression adenovirus increased expression of Ocence of control adenovirus and OPG overexpression adenovirus B. mRNA exG after adenovirus infection C. Protein expression of OPG after adenovirus in**P < 0.05 compared to Adv-GFP

化水平明顯降低(P < 0.05)，提示所選用的葡萄糖胺及 FFAs 的作用時間和濃度條件下出現(xiàn)了胰島素抵抗。為后續(xù)研究細(xì)胞胰島素信號通路提供良好的基礎(chǔ)。圖1.4 細(xì)胞胰島素抵抗造模成功（A.葡萄糖胺及FFAs處理后InsR及AKT蛋白水平變化圖 B.葡萄糖胺處理后 InsR 及 AKT 蛋白水平的變化對應(yīng)柱狀圖 C. FFAs 處理后 InsR 及 AKT 蛋白水平的變化對應(yīng)柱狀圖）(**P < 0.05)Figure 1.4 Successful modeling of cellular insulin resistance (A. Changes in InsR and AKTprotein levels after glucosamine and FFAs treatment B. Quantitative analysis ofcorresponding p-InsR protein Levels after glucosamine treatment C. Histogram correspondingand p-AKT protein Levels after FFAs treatment) **P < 0.05 compared to CT or BSA3.3 過表達(dá) OPG 后,糖原合成減少，糖攝取降低小鼠肝癌細(xì)胞 Hepal1-6 細(xì)胞和人正常肝細(xì)胞 L02 感染 OPG 過表達(dá)腺病毒（Adv-OPG）或者對照空載病毒（Adv-GFP）后，用葡萄糖胺進(jìn)行造模處理，觀察細(xì)胞糖原合成情況及葡萄糖攝取情況。結(jié)果如圖 1.5A，糖原染色結(jié)果顯示胰島素抵抗情況下 OPG 過表達(dá)后細(xì)胞內(nèi)的糖原顆粒明顯減少了；定量檢測細(xì)胞內(nèi)的糖


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