發(fā)布時間：2020-04-11 15:32

【摘要】：目的:觀察持續(xù)性高糖及波動性高糖對MC3T3-E1成骨細胞影響及分子機制的研究。方法:體外培養(yǎng)MC3T3-E1成骨細胞,分為正常對照組、持續(xù)性高糖組、波動性高糖組、N-乙酰半胱氨酸(NAC)組及氯喹(CQ)組。NAC組包括NAC組、持續(xù)性高糖+NAC組和波動性高糖+NAC組;CQ組包括CQ組、持續(xù)性高糖+CQ組和波動性高糖+CQ組。CCK-8法檢測細胞增殖能力,流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡率,DCFH-DA和MitoSOX熒光探針觀察細胞總體氧化應(yīng)激水平和線粒體氧化應(yīng)激水平,JC-1染料檢測細胞內(nèi)線粒體膜電位變化,Western blot和細胞免疫熒光法檢測各組細胞內(nèi)蛋白表達,透射電鏡觀察細胞內(nèi)自噬小體形成。結(jié)果:(1)與正常對照組相比,持續(xù)高糖組和波動性高糖組細胞增殖下降、凋亡增加,波動性高糖組變化更顯著。與正常對照組相比,持續(xù)高糖組和波動高糖組Bcl-2蛋白表達減少,Bax、Caspase3、Cleaved caspase3及Cytochrome c蛋白表達增加,且波動性高糖組較持續(xù)高糖組改變更顯著。熒光結(jié)果顯示持續(xù)性高糖及波動性高糖組較正常對照組細胞內(nèi)ROS、線粒體內(nèi)ROS生成增多,線粒體膜電位(△Ψm)下降,波動性高糖組變化更加明顯。(2)高糖狀態(tài)下,MC3T3-E1成骨細胞內(nèi)自噬相關(guān)蛋白LC3-Ⅱ、Beclin1及線粒體自噬相關(guān)蛋白BNIP3表達增多,P62蛋白表達減少,自噬小體生成增多,波動性高糖組變化更明顯。(3)在MC3T3-E1成骨細胞中加入NAC后,細胞內(nèi)ROS生成減少,Bcl-2表達增加,Bax、Caspase3、Cleaved caspase3 及 Cytochrome c 表達減少,LC3-Ⅱ、Beclin1及Bnip3蛋白減少,細胞凋亡率降低。(4)與正常對照組比較,持續(xù)性高糖組、波動性高糖組MC3T3-E1成骨細胞內(nèi)p-Akt、p-mTOR減少,且波動性高糖組下降更明顯;加入NAC后,MC3T3-E1成骨細胞p-Akt及p-mTOR表達增加。(5)與正常對照組相比,高糖狀態(tài)導(dǎo)致MC3T3-E1成骨細胞凋亡增加,加入CQ后,細胞凋亡進一步顯著增加,同時LC3-Ⅱ蛋白增多,Bnip3蛋白表達減少。結(jié)論:(1)高糖誘導(dǎo)MC3T3-E1成骨細胞增殖降低、凋亡增加,且波動性高糖的影響較持續(xù)性高糖更明顯。(2)高糖影響MC3T3-E1成骨細胞的機制可能與細胞內(nèi)氧化應(yīng)激水平升高、線粒體損傷及自噬相關(guān)。
【圖文】：

與正常對照組相比，持續(xù)性高糖組和波動性高糖組ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１成骨細胞增殖均逡逑顯著下降（Ｐ＜0．0ｌ）；與持續(xù)性高糖組相比，波動性高糖組細胞增殖下降更明顯，差異逡逑有統(tǒng)計學(xué)意義（尸＜0．0５）（圖１）。逡逑１．５－１逡逑Ｉ１＂邋■邋＊邋－逡逑|>通置１逡逑圖１持續(xù)性高糖及波動性高糖對ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１細胞增殖的影響逡逑Ｆｉｇ邋１邋Ｅｆｆｅｃｔｓ邋ｏｆ邋ＨＧ邋ａｎｄ邋ＧＦ邋ｏｎ邋ｔｈｅ邋ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１邋ｃｅｌｌｓ逡逑注：與正常對照組相比，＊Ｐ＜邋０．０１；與持續(xù)性高糖組相比，，＃＿Ｐ＜０．０５。逡逑＊Ｐ＜邋０．０１，邋ｖｓ邋Ｃｔｒ邋ｇｒｏｕｐ；邋＃Ｐ＜０．０５，邋ｖｓ邋ＨＧ邋ｇｒｏｕｐ．逡逑２．１．２持續(xù)性高糠及波動性高糖對ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１細胞凋亡的影響逡逑與正常對照組相比，持續(xù)性高糖組和波動性高糖組細胞凋亡率均升高（尸＜０．邋０５；逡逑Ｐ＜０．邋０１）。與持續(xù)性高糖組相比，波動性高糖組細胞凋亡顯著增多0Ｐ＜０．邋０１）（圖２）。逡逑１６逡逑

熒光顯微鏡下觀察可見持續(xù)性氋糖組和波動性氋糖組ＤＣＦＨ－ＤＡ探針熒光強逡逑度較正常對照組均增強；與持續(xù)性高糖組相比，波動性高糖組熒光強度增強更為逡逑明顯（圖３）。逡逑１７逡逑
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R587.1;R580

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 郭寶磊;楊茂偉;梁單;曹軍軍;楊蕾;郭曉東;;高糖通過提高ROS水平和鈣超載誘導(dǎo)小鼠MC3T3-E1成骨細胞凋亡[J];中國病理生理雜志;2012年02期

2 周瑋;萬利;張勇;朱娟;荀明生;王加林;;高糖及高糖波動對MG63細胞株氧化應(yīng)激的影響[J];中國骨質(zhì)疏松雜志;2011年12期

本文編號：2623749