本研究基于轉(zhuǎn)錄組獲得的CpDHN轉(zhuǎn)錄本序列,以番木瓜‘臺(tái)農(nóng)二號(hào)’組培苗葉片為材料,采用RT-PCR技術(shù)克隆了該基因包含完整ORF在內(nèi)的425 bp cDNA序列。序列分析表明,CpDHN預(yù)測(cè)編碼93個(gè)氨基酸,其理論分子量為10.50 kDa、等電點(diǎn)為6.62、總平均疏水指數(shù)為-1.984、核定位。除保守的K片段外,蛋白還含有1個(gè)S片段,可歸為KS型脫水素。在擬南芥中的10個(gè)脫水素中,CpDHN與AtLEA8的親緣關(guān)系最近,相似性為53.3%。值得注意的是,雖然CpDHN的編碼區(qū)不存在內(nèi)含子,但其3’UTR含有1個(gè)與AtLEA8類似的內(nèi)含子。表達(dá)譜分析顯示,該基因在根和葉片中均受干旱脅迫誘導(dǎo)。此外,還構(gòu)建了CpDHN的原核表達(dá)載體,SDS-PAGE分析顯示,該蛋白在大腸桿菌中可高效表達(dá)。這些結(jié)果為下一步的功能鑒定奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

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圖6CpDHN基因不同組織干旱脅迫下表達(dá)特性Fig.6ExpressionprofilesofCpDHNgeneindifferenttissuesunderdroughtstress

2410熱帶作物學(xué)報(bào)第41卷K片段用陰影標(biāo)識(shí)，S片段用方框標(biāo)識(shí)，Y片段用下劃線標(biāo)識(shí)。TheKsegmentismarkedwithshadow,whereastheSsegmentandYsegmentareboxedorunderlined,respectively.圖4CpD....

圖7CpDHN在大腸桿菌中表達(dá)后SDS-PAGE分析Fig.7SDS-PAGEanalysisofCpDHN-overexpressedE.coli

第12期郭靜遠(yuǎn)等:番木瓜干旱脅迫相關(guān)CpDHN基因的克隆與原核表達(dá)2411圖7CpDHN在大腸桿菌中表達(dá)后SDS-PAGE分析Fig.7SDS-PAGEanalysisofCpDHN-overexpressedE.coli3討論植物的自然生長(zhǎng)環(huán)境是由一系列復(fù)雜的非生物脅迫和生物脅....

圖4CpDHN與10個(gè)擬南芥脫水素的多序列比對(duì)Fig.4MultiplesequencealignmentofCpDHNandtenAtDHNsK片段用陰影標(biāo)識(shí)，S片段用方框標(biāo)識(shí)

2410熱帶作物學(xué)報(bào)第41卷K片段用陰影標(biāo)識(shí)，S片段用方框標(biāo)識(shí)，Y片段用下劃線標(biāo)識(shí)。TheKsegmentismarkedwithshadow,whereastheSsegmentandYsegmentareboxedorunderlined,respectively.圖4CpD....

圖5CpDHN與10個(gè)擬南芥脫水素的進(jìn)化分析Fig.5PhylogeneticanalysisofCpDHNandtenAtDHNs

2410熱帶作物學(xué)報(bào)第41卷K片段用陰影標(biāo)識(shí)，S片段用方框標(biāo)識(shí)，Y片段用下劃線標(biāo)識(shí)。TheKsegmentismarkedwithshadow,whereastheSsegmentandYsegmentareboxedorunderlined,respectively.圖4CpD....

本文編號(hào)：3972966