為進(jìn)一步開發(fā)利用華北耬斗菜資源并對(duì)其開展分子生物學(xué)研究,利用改良CTAB法提取華北耬斗菜植株的根、莖、葉、花和種子等5種組織總DNA,通過觀察提取過程中各組織的表現(xiàn)和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)提取的總DNA,旨在找到最適宜提取總DNA的華北耬斗菜組織材料。結(jié)果表明:華北耬斗菜根、莖、葉、花和種子5種組織總DNA A₂₆₀/A₂₈₀比值依次為1.545、1.553、1.785、1.724、1.464,濃度為1 275 ng/μL、1 825 ng/μL、2 500 ng/μL、1 250 ng/μL、2 050 ng/μL。其中葉片總DNA提取效果最好,A₂₆₀/A₂₈₀比值接近純DNA(1.8～2.0),總DNA濃度達(dá)到2 500 ng/μL。因此,華北耬斗菜葉片更適宜用改良CTAB法提取其總DNA。

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圖2各組織研磨后的顏色與質(zhì)地

各組織研磨后的表現(xiàn)如圖2所示，華北耬斗菜各組織都比較均勻，莖類較難研磨，存在少許纖維素，其中可能含有較多分化完全的導(dǎo)管與篩管細(xì)胞；根類組織變褐現(xiàn)象嚴(yán)重，可能含有較多的多酚，易氧化變黑；花類組織含有較多的水分，研磨過程中色澤淡化，且色素被β-巰基乙醇還原為黃色；葉類組織研磨效果較好....

圖3水浴后加入24∶1氯仿/異戊醇的效果

加入24∶1氯仿/異戊醇結(jié)果如圖3所示，根、莖、葉和種子不易與24∶1氯仿/異戊醇分散，蛋白質(zhì)層較厚；花類組織材料與有機(jī)相分層明顯，大部分色素溶于基層有機(jī)相，少量色素溶于上清液，多糖、蛋白質(zhì)含量較少。2.1.3各組織離心分層效果

圖4各組織第一次離心結(jié)果

離心可使CTAB-蛋白質(zhì)/多糖絡(luò)合物加速沉淀，液體明顯分為3層，上層為溶解有DNA的高鹽緩沖液，中間層為CTAB-蛋白質(zhì)/多糖的復(fù)雜絡(luò)合物，下層為溶解有色素、酯類、酚類的氯仿/異戊醇。從圖4可以看出，根類組織上清液渾濁，有較多的多酚被氧化變?yōu)楹稚磺o、葉、種子類組織分層明顯，上清....

圖5各組織總DNA沉淀效果

由于DNA不溶于異丙醇等有機(jī)溶劑，通過離心可使其沉淀下來。離心后沉淀如圖5，可以看出根的總DNA沉淀最少，且沉淀中有褐色雜質(zhì)；莖的總DNA沉淀少，顏色半透明偏白；葉和種子的總DNA沉淀適中，顏色白，效果好；花瓣的總DNA沉淀少，為淺黃色，有色素雜質(zhì)殘留。2.2紫外分光光度計(jì)結(jié)果

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