堆肥化在農(nóng)業(yè)廢物的處理中己得到了廣泛的應(yīng)用。木質(zhì)素是農(nóng)業(yè)廢物堆肥過程中的主要限速有機(jī)物,其降解被認(rèn)為是快速堆肥的關(guān)鍵。漆酶是一種含多個(gè)銅原子的多酚氧化酶,能催化氧化多種芳香族化合物,是木質(zhì)素降解酶系中一員,在木質(zhì)素礦化降解、腐殖質(zhì)形成等過程中發(fā)揮重要作用。 本研究利用秸稈等原料對農(nóng)業(yè)廢物堆肥過程進(jìn)行模擬,從堆肥樣品中分離得到一株產(chǎn)漆酶活力較高的菌株(菌株編號C2),對其進(jìn)行了鑒定,并研究了該菌株的發(fā)酵條件、酶的分離純化和性質(zhì)以及漆酶基因。結(jié)論歸納如下： 以愈創(chuàng)木酚被氧化顯色作為檢測方法,篩選出了一株產(chǎn)漆酶能力強(qiáng)的菌株。通過對該菌株培養(yǎng)特征、形態(tài)特征觀察及ITS序列分析,鑒定該菌株屬于哈茨木霉,命名為Hypocrea lixii sp. C2,其ITS序列的GenBank登錄號為HQ699075。 對Hypocrea lixii sp. C2的液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)漆酶條件進(jìn)行了優(yōu)化,得到的優(yōu)化培養(yǎng)基為：葡萄搪20g,尿素2.21g,KH2PO43g, MgSO4·7H2O2g, CuSO40.3g,加蒸餾水至1000mL,愈創(chuàng)木酚0.05%,pH4.0,30℃培養(yǎng),培養(yǎng)時(shí)間4d。以2,2...

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
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附表索引
第1章 緒論
    1.1 農(nóng)業(yè)廢物概述
    1.2 堆肥化
        1.2.1 厭氧堆肥
        1.2.2 好氧堆肥
        1.2.3 好氧堆肥過程的影響因素
        1.2.4 農(nóng)業(yè)廢物堆肥中的難降解物質(zhì)
    1.3 木質(zhì)素的生物降解
        1.3.1 木質(zhì)素的存在與結(jié)構(gòu)
        1.3.2 木質(zhì)素的生物降解
    1.4 漆酶簡介
        1.4.1 漆酶的結(jié)構(gòu)特征
        1.4.2 漆酶催化反應(yīng)機(jī)理
        1.4.3 漆酶作用的底物
        1.4.4 漆酶酶活的測定
        1.4.5 漆酶的分離純化
        1.4.6 漆酶的分子生物學(xué)
        1.4.7 漆酶的應(yīng)用
    1.5 本課題研究的內(nèi)容與意義
第2章 產(chǎn)漆酶菌株的篩選及鑒定
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料與處理
        2.2.2 培養(yǎng)基
        2.2.3 試劑
        2.2.4 實(shí)驗(yàn)設(shè)備
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 取樣方法
        2.3.2 產(chǎn)漆酶菌株的篩選
        2.3.3 產(chǎn)漆酶菌株的鑒定
    2.4 結(jié)果與討論
        2.4.1 菌株的篩選
        2.4.2 菌株的鑒定
    2.5 本章小結(jié)
第3章 Hypocrea lixii sp.C2漆酶液體培養(yǎng)條件的研究
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.2 培養(yǎng)基
        3.2.3 試劑
        3.2.4 實(shí)驗(yàn)設(shè)備
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 液態(tài)發(fā)酵及漆酶的制備
        3.3.2 漆酶活力的測定
        3.3.3 菌體干重的測定
        3.3.4 液體培養(yǎng)條件的優(yōu)化
    3.4 結(jié)果與討論
        3.4.1 優(yōu)化前菌株Hypocrea lixii sp.C2的液體培養(yǎng)
        3.4.2 不同碳源、氮源對Hypocrea lixii sp.C2產(chǎn)漆酶的影響
        3.4.3 愈創(chuàng)木酚加入量對Hypocrea lixii sp.C2產(chǎn)漆酶的影響
        3.4.4 CuSO₄加入量對Hypocrea lixii sp.C2產(chǎn)漆酶的影響
        3.4.5 培養(yǎng)基初始pH對Hypocrea lixii sp.C2產(chǎn)漆酶的影響
        3.4.6 培養(yǎng)溫度對Hypocrea lixii sp.C2產(chǎn)漆酶的影響
        3.4.7 發(fā)酵條件優(yōu)化后Hypocrea lixii sp.C2液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)酶曲線
    3.5 本章小結(jié)
第4章 Hypocrea lixii sp.C2漆酶的分離純化及酶學(xué)性質(zhì)研究
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.2 培養(yǎng)基
        4.2.3 試劑
        4.2.4 實(shí)驗(yàn)設(shè)備
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 蛋白質(zhì)含量測定
        4.3.2 漆酶的分離純化
        4.3.3 漆酶的酶學(xué)性質(zhì)
    4.4 結(jié)果與討論
        4.4.1 漆酶的分離純化
        4.4.2 漆酶的酶學(xué)性質(zhì)
    4.5 本章小結(jié)
第5章 Hpocrea lixii sp.C2漆酶基因片段研究
    5.1 引言
    5.2 實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備
        5.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.2.2 培養(yǎng)基
        5.2.3 試劑
        2.2.4 實(shí)驗(yàn)設(shè)備
    5.3 實(shí)驗(yàn)方法
        5.3.1 菌株培養(yǎng)
        5.3.2 DNA提取
        5.3.3 漆酶基因片段研究
    5.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        5.4.1 PCR擴(kuò)增結(jié)果
        5.4.2 序列分析
    5.5 本章小結(jié)
結(jié)論及展望
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄A (攻讀碩士學(xué)位期間所發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄)



本文編號：4027036