發(fā)布時(shí)間：2024-06-12 02:31

　　維吉尼亞霉素(virginiamycin,簡(jiǎn)稱VGM)是一種由維吉尼亞鏈霉菌(Streptomyces virginiae)經(jīng)發(fā)酵產(chǎn)生的內(nèi)脂環(huán)肽類的鏈陽(yáng)性抗生素,由多種組分組成的化合物,主要是由巨環(huán)內(nèi)脂類的M1因子和環(huán)狀多肽類的S1因子構(gòu)成。VGM因具有結(jié)構(gòu)新穎、安全無毒,不易產(chǎn)生耐藥突變株等特點(diǎn),是一種不可多得的應(yīng)用前景良好的動(dòng)物飼料添加劑。目前我國(guó)每年大量進(jìn)口該產(chǎn)品,使用成本較高,因此對(duì)維吉尼亞鏈霉菌進(jìn)行誘變選育以及開展發(fā)酵工藝優(yōu)化研究具有十分重要的社會(huì)效益與經(jīng)濟(jì)效益。本課題首先建立了一種高通量篩選方法,即利用24孔板作為誘變菌株的微型培養(yǎng)平臺(tái),再結(jié)合管碟法和高效液相色譜法(HPLC)作為維吉尼亞霉素檢測(cè)和篩選方法,以期篩選高產(chǎn)VGM的突變株。管碟法簡(jiǎn)單方便易于觀察,主要用于大量誘變菌株的初篩,可以快速提高篩選效率。HPLC檢測(cè)方法準(zhǔn)確靈敏,因此將其作為VGM的定量檢測(cè)方法。其次,利用單因素實(shí)驗(yàn)確定24微孔板培養(yǎng)體系最佳發(fā)酵培養(yǎng)基裝液量為1.25mL,最佳接種量為5%,最佳發(fā)酵時(shí)間為30h,最佳轉(zhuǎn)速為240rpm,通過相關(guān)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),采用24孔板的微量培養(yǎng)體系用于大量菌株的快速篩選是...

【文章頁(yè)數(shù)】：81 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖３．１維吉尼亞霉素液相色譜圖??

為８．５ｍｉｎ和１４．４ｍｉｎ，發(fā)酵液樣品中的和ＳＷ呆留時(shí)間分別為，二者基本一致，??且沒有明顯的干擾峰，由此可以說明，以上方法可以用來檢測(cè)ＶＧＭ含量。標(biāo)準(zhǔn)??品的分離色譜圖（圖３．１）與發(fā)酵液樣品的分離色譜圖（圖３．２）如下。??ｔ：＼ｒｎ?以化牝?ｚｕ?ｍｕ／ｚｕｗｉｔｓｕｃ....

圖３．?３維吉尼亞霉素含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線??

?Ｔｉｍｅ?１１．６１９?ｈｔｅｎ．０２２］?＞??ＩＺＺ．??ｏ＇Ｔ－１?￣＇￣＇￣?２：５?￣＇￣＇￣?ｓ！〇?？?￣＇￣￣＇ｉｓ，?￣＇￣￣?１＾．０?￣＇￣?ｌｉｓ?￣＇￣＇￣?ｌｉｏ?￣￣＇￣?ｉｆｓ?￣＇￣＇￣?ｍｉｎ??圖３．?２發(fā)酵樣品液相色譜圖??Ｆｉｇ３．２?....

圖３．?２發(fā)酵樣品液相色譜圖??

３．?１．３維吉尼亞霉素ＨＰＬＣ檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)曲線??每次吸�。飑枺酰觳煌瑵舛鹊臉�(biāo)準(zhǔn)溶液，用ＨＰＬＣ檢測(cè)。以峰面積和ＶＧＭ質(zhì)??量濃度（ｍｇ／Ｌ）分別作為橫坐標(biāo)，縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖３．３，在５？５０?ｍｇ／Ｌ??時(shí)，峰面積與維吉尼亞霉素組分含量呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，其回歸方程為....

圖３．?５藤黃微球菌抑菌圈??

將敏感菌在３７?＂Ｃ培養(yǎng)１６?ｈ，以１．５％接種量加入敏感菌培養(yǎng)基中，制備雙碟。??以抑菌圈直徑為縱坐標(biāo)，ＶＧＭ標(biāo)準(zhǔn)品效價(jià)的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)（Ｕ／ｍＬ）作標(biāo)準(zhǔn)曲線，??如圖３．４，在１０￣６０Ｕ／ｍＬ?（４￣２５ｍｇ／Ｌ）時(shí)，抑菌圈與ＶＧＭ含量呈現(xiàn)良好的線??性關(guān)系，其回歸方程為｝＾....

本文編號(hào)：3993089