發(fā)布時(shí)間：2020-11-21 13:38

　　 目的:初步測(cè)定酒糟粗提物的成分并探討酒糟粗提物對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞的抑制作用及其相關(guān)作用機(jī)制。方法:使用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(LC-MS)分析酒糟粗提物的成分。采用RTCA檢測(cè)不同濃度酒糟粗提物對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞的抑制作用。在不同濃度酒糟粗提物刺激肝癌HepG2細(xì)胞24h后,利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)的細(xì)胞周期分布,使用Real-Time qPCR及Western Blot檢測(cè)周期周期相關(guān)蛋白及其依賴性激酶的表達(dá)量的變化;使用Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其遷移及侵襲能力的變化;利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率的變化情況,Real-Time qPCR及Western Blot檢測(cè)凋亡相關(guān)標(biāo)志性分子表達(dá)量的變化;Western Blot檢測(cè)PI3K-AKT通路相關(guān)分子表達(dá)量的變化。結(jié)果:LC-MS測(cè)得酒糟粗提物中含有43種物質(zhì);濃度為24.9μg/ml的酒糟粗提物對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞的增殖影響不大(p0.05),濃度為49.5μg/ml的酒糟粗提物在12h對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞的增殖影響不大(p0.05),除此外,隨酒糟粗提物濃度及刺激時(shí)間的增加,與對(duì)照組0μg/ml相比,處理組的肝癌HepG2細(xì)胞增殖能力受到了明顯抑制(p0.05),作用24h后的半數(shù)抑制濃度IC50為75.5μg/ml。HepG2細(xì)胞的侵襲遷移能力受到了明顯抑制,并且受抑制的HepG2細(xì)胞數(shù)隨酒糟粗提物濃度的增加而增多(p0.05);隨酒糟粗提物濃度的增加,肝癌HepG2細(xì)胞的S期占比逐漸升高,S期相關(guān)蛋白CyclinA及其激酶CDK2的表達(dá)逐漸降低;處理組肝癌HepG2細(xì)胞的促凋亡分子Bax、CYTC、Cleaved-Caspase-9及Cleaved-Caspase-3表達(dá)量逐漸升高(p0.05),而抗凋亡分子Bcl-2、Caspase-9、Caspase-3表達(dá)逐漸降低(p0.05);PI3K-AKT通路中p-PI3K及p-AKT表達(dá)逐漸降低(p0.05),t-PI3K及t-AKT未發(fā)生明顯變化(p0.05)。結(jié)論:酒糟粗提物含多種活性物質(zhì);酒糟粗提物呈時(shí)間濃度依賴性抑制HepG2細(xì)胞的增殖;酒糟粗提物呈濃度依賴性抑制HepG2細(xì)胞遷移侵襲;酒糟粗提物通過下調(diào)S期相關(guān)蛋白CyclinA及其激酶CDK2的表達(dá),誘導(dǎo)肝癌HepG2細(xì)胞主要阻滯在細(xì)胞周期S期;酒糟粗提物通過抑制PI3K-AKT通路,激活介導(dǎo)凋亡的線粒體通路,引起肝癌HepG2細(xì)胞凋亡。
【學(xué)位單位】：川北醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：TS261.9;TQ460.6;R735.7
【部分圖文】：

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圖 2 A:RTCA 結(jié)果；B：不同濃度藥物在加藥后不同時(shí)間點(diǎn)對(duì) HepG2 細(xì)胞 NCI 值的影響。C: 24h 的劑量反應(yīng)曲線。注：*** p＜0.001（與對(duì)照組 0μg/ml 相比）

3 酒糟粗提物抑制 HepG2 細(xì)胞的遷移及侵襲結(jié)果表明，隨著酒糟粗提物濃度升高，在遷移組和侵襲組中穿ranswell小室的肝癌HepG2細(xì)胞數(shù)量均明顯減少，表明經(jīng)酒糟粗提物后肝癌HepG2細(xì)胞的遷移、侵襲能力降低，與對(duì)照組0μg/ml相比有顯異（p<0.05），見圖3。
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本文編號(hào)：2893083