研究背景:甲基苯丙胺Methamphetamine（METH）,是一種廣泛濫用的非法精神藥物。我們以前的研究表明,CCAAT增強子結(jié)合蛋白β（C/EBPβ）是一個重要的調(diào)節(jié)因子,參與了 METH誘導(dǎo)的神經(jīng)元自噬和凋亡。然而,這一過程的具體分子機制仍不清楚。以往的研究表明,DDIT4、Trib3、α-syn參與了 METH誘導(dǎo)的神經(jīng)毒性。于是我們猜測C/EBPββ參與了 METH誘導(dǎo)的DDIT4介導(dǎo)的自噬和Trib3介導(dǎo)的凋亡。方法:第一章第一節(jié)建立時間梯度和濃度梯度的METH中毒體外模型,通過Western Blot觀察隨著METH給藥時間和濃度增加,TSC2、pTSC2等蛋白的表達量情況。第一章第二節(jié)構(gòu)建DDIT4特異性小干擾RNA,下調(diào)DDIT4表達后,Western Blot檢測pTSC2和mTOR自噬通路相關(guān)蛋白的表達。第一章第三節(jié)構(gòu)建抑制C/EBPβ表達的特異性小干擾RNA,Western Blot檢測經(jīng)Si-C/EBPβ處理后,DDIT4、pTSC2及mTOR自噬通路相關(guān)蛋白的表達。第二章第一節(jié)構(gòu)建抑制α-syn表達的小干擾,Western Blot檢測經(jīng)Si-α-syn處... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１：?ＭＥＴＨ處理ＳＨ－ＳＹ５Ｙ細胞，ｐ－ＴＳＣ２（ｓｅｒｌ３７８）／ＴＳＣ２的蛋白表達增加??（Ａ、Ｂ：蛋白表達情況，Ｃ、Ｄ：統(tǒng)計學(xué)分析．又士?ＳＤ，ｎ＝３／ｇｒｏｕｐ，、５．（：〇付１＊〇１〇６１１５廣口＜０．０５）??

認為ＤＤＩＴ４抑制可以有效降低ＭＥＴＨ誘導(dǎo)的ＳＨ－ＳＹ５Ｙ細胞中ｐ－ＴＳＣ２??增加。給予ＭＥＴＨ處理后，ｐ－ｍＴＯＲ／ｍＴＯＲ的表達量明顯降低，而ＤＤＩＴ４敲低??后，能夠升高ｐ－ｍＴＯＲ／ｍＴＯＲ的表達量（圖２：?Ａ、Ｄ）。ＭＥＴＨ＋?ＳｉＤＤＩＴ４＃?１組和??ＳｉＤＤＩＴ４＃?２組的Ｐ－ｍＴＯＲ／?ｍＴＯＲ表達量與ＭＥＴＨ＋ｓｉＮＣ組比分別升高了??４１．３４％和４５．７％；同樣，ＭＥＴＨ處理后，自噬相關(guān)蛋白Ｂｅｃｌｉｎ－１和ＬＣ３－Ｉ／ＩＩ的??表達升高，ＤＤＩＴ４敲低后，能夠逆轉(zhuǎn)自噬的升高趨勢（圖２：?Ａ、Ｅ）。Ｂｅｃｌｉｎ－１分??別減低了?３２．２３％和５１．７２％，而ＬＣ３分別降低了?３０．４２％和４９．９４％，說明抑制ＤＤＩＴ４??可以抑制ＭＥＴＨ誘導(dǎo)的ｐ－ＴＳＣ２／ｍＴＯＲ通路介導(dǎo)的自噬。??Ａ?Ｂ?Ｃ?ｈ?ｐ－ｒｎ????ｒ°；?ｉ丄ｆ?垂??ｐ－ＴＳＣ２（ｓｅｒ１３６７）?ｍ．ｇｗ—勵?＇ｉｉ?ｉｌｌｌ?＾－｜｜｜｜??ＭＥ＇ｍ?？?－?？?＋?？?＋?ＭＥＴＨ?．．．?＋?？?＋??＾〇＾２４４８＞?丨一祕?辦?｜?＾?ＣｔｒｌｓｉＲＮＡ?，?．?．?＋?．?．?Ｃｔｒｌ＾ＲＮＡ????ｓｉＤＤＩＴ４＃１?．?ｓｉＤＤＩＴ４＃１?．?＋?？■?＋?．??ｍＴ〇Ｒ?２８９Ｋ〇ａ?ｓｊＤＤ（Ｔ４＃２?？?？?？?－?．?？?ｓｉＤＤＩＴ４＃２??Ｂ？ｃｌｉｎ－１?綱１＾?ＷｋＤａ?〇?——ｉ??＿＊?Ｅ?．?■Ｂ＾ｌｉｎ－Ｉ?ｐ－

（＊ｐ＜０．０５，?ｎ＝３），認為Ｃ／ＥＢＰＰ抑制可以有效降低ＭＥＴＨ誘導(dǎo)的ＳＨ－ＳＹ５Ｙ細??胞中?ＤＤＩＴ４?增加。另外?ｐ－ＴＳＣ２（ｓｅｒｌ３７８）／ＴＳＣ２、Ｂｅｃｌｉｎ－１?和?ＬＣ３－Ｉ／ＩＩ?的表達量??在給予ＭＥＴＨ處理后也增加，在敲低Ｃ／ＥＢＰｐ后表達量下降（圖３：?Ａ、Ｃ、Ｅ）。??Ｐ－ＴＳＣ２分別減低了?４０．７４％，和２４．７３％，而ｐ－ｍＴＯＲ／ｍＴＯＲ的表達量給予ＭＥＴＨ??處理后下降，在敲低Ｃ／ＥＢＰｐ后表達量升高（圖３：?Ａ、Ｄ）。ＭＥＴＨ＋Ｓｉ－Ｃ／ＥＢＰ（３＃１??組和Ｓｉ－Ｃ／ＥＢＰＰ＃?２組的ｐ－ｍＴＯＲ／?ｍＴＯＲ表達量與ＭＥＴＨ＋ｓｉＮＣ組比分別升高了??８１．７３％和?７０．０３％，而?Ｂｅｃｌｉｎ－１?分別減低了?２０．３２％和?２０．７２％，而?ＬＣ３?分別降低??了?４１．２４％和４８．８６％?，說明抑制Ｃ／ＥＢＰｐ可以抑制ＭＥＴＨ誘導(dǎo)的??ＤＤＩＴ４／ｐ－ＴＳＣ２／ｍＴＯＲ通路介導(dǎo)的自噬。所有這些結(jié)果表明Ｃ／ＥＢＰＰ通過ＤＤＩＴ４／??ＴＳＣ２／ｍＴＯＲ信號通路在甲基苯丙胺誘導(dǎo)的神經(jīng)細胞自噬中發(fā)揮了重要作用。??Ａ?Ｂ?■ＯＥＢＰＰ?＾―，?，＿Ｃ???＊?＿????１Ｉ?Ａ?Ｉ?＾??Ｃ＿?奢嫌?鱗條?ｉ?３ＳｋＤａ?｜?２＇?Ｉｆ?＿＿?Ｗ?３Ｉ?＿??－?ｆ

【參考文獻】：
期刊論文
[1]甲基苯丙胺對相關(guān)腦區(qū)的神經(jīng)毒性作用[J]. 李學(xué)鋒,邱平明,金賀,劉明,王慧君.  解剖學(xué)雜志. 2007(01)
[2]轉(zhuǎn)錄因子C/EBP β的生物學(xué)功能[J]. 成軍.  世界華人消化雜志. 2004(02)



本文編號：2913619