大理地區(qū)非結(jié)核分枝桿菌臨床分離株的菌種鑒定及耐藥性分析
發(fā)布時(shí)間：2020-12-07 10:01
目的:對(duì)大理地區(qū)疑似非結(jié)核分枝桿菌（（Non-tuberculous mycobacteria,NTM）的臨床分離株進(jìn)行菌種鑒定;通過(guò)藥敏試驗(yàn)檢測(cè)NTM的耐藥性,分析NTM耐藥菌株對(duì)利福平、異煙肼耐藥相關(guān)基因rpoB和inhA的基因突變情況,初步研究NTM的耐藥機(jī)制。方法:1.非結(jié)核分枝桿菌臨床分離株的的菌種鑒定:運(yùn)用PNB/TCH鑒別培養(yǎng)基將18株疑似NTM的臨床株進(jìn)行初步菌種鑒定,再設(shè)計(jì)16SrRNA引物,以初步鑒定為NTM的臨床分離株的DNA為模板進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)（Polymerase chain reaction,PCR）,PCR擴(kuò)增產(chǎn)物送測(cè)序公司測(cè)序,將結(jié)果提交NCBI-BLAST網(wǎng)站,與GenBank中的標(biāo)準(zhǔn)序列進(jìn)行比較和同源性分析,獲得菌種鑒定結(jié)果。結(jié)果所得2株膿腫分枝桿菌再用hsp65和rpoB引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增、測(cè)序、BLAST比對(duì)后,可以將此2株膿腫分枝桿菌（Mycobacterium abscessus,M.abscessu）鑒定為不同亞種。2.非結(jié)核分枝桿菌的耐藥性研究（1）非結(jié)核分枝桿菌的藥物敏感性測(cè)定:采用比例法對(duì)所有NTM進(jìn)行包括異煙肼（Isoniazid...
【文章來(lái)源】：大理大學(xué)云南省
【文章頁(yè)數(shù)】：66 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
圖1.1分枝桿菌抗酸染色（100×）
圖 1.2 分枝桿菌在中性羅氏培養(yǎng)基上的培養(yǎng)結(jié)果Fig 1.2 The result of Mycobacterium in Neutral Roche medium養(yǎng)基初步菌種鑒定結(jié)果種于 TCH、PNB 和中性羅氏培養(yǎng)基（L-J）后，經(jīng) 4 周培養(yǎng)后，桿菌生長(zhǎng)情況，發(fā)現(xiàn)所有菌株在中性羅氏培養(yǎng)基（L-J）上均生果可以采用。以 NTM 在 PNB/TCH 培養(yǎng)基上均要生長(zhǎng)這一特點(diǎn)養(yǎng)基法將 18 株臨床分離株進(jìn)行初步菌種鑒定，鑒定結(jié)果如表 1. 14 株、人型結(jié)核分枝桿菌 3 株和牛型結(jié)核分枝桿菌 1 株。表 1.4 鑒別培養(yǎng)基的菌種鑒別結(jié)果Table 1.4 The results of identification medium菌種 Strain NTM M.tuberculosis M.bovis鑒定結(jié)果 PNB (+) TCH (+) PNB (－) TCH (+) PNB (－) TCH (－菌株數(shù)（株） 14 3 1
16S rRNA 基因 PCR 擴(kuò)增電泳圖。（M:DL 2000 Marker; H:標(biāo)準(zhǔn)株-7 的 PCR 產(chǎn)物）ification of different strains of 16SrRNA gene (M: Nucleic acid markeains H37Rv; 1-7: PCR products of strains)因的擴(kuò)增及測(cè)序結(jié)果 NTM 的臨床分離株的 hsp65 基因在經(jīng) PCR 擴(kuò)增后，同大小約為 365bp 的 DNA 片段，見圖 1.4，分別回收、測(cè)過(guò)與 GenBank 中的標(biāo)準(zhǔn)序列相比較，可鑒定出膿腫分枝
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]AIDS合并非結(jié)核分枝桿菌肺病的診治進(jìn)展[J]. 黃葵,李勇. 傳染病信息. 2017(02)
[2]非結(jié)核分枝桿菌肺病診治研究進(jìn)展[J]. 黃葵,李勇. 內(nèi)科. 2017(02)
[3]免疫支持對(duì)非結(jié)核分枝桿菌肺病患者療效影響[J]. 江萬(wàn)航,劉國(guó)標(biāo),杜正新,李方知. 廣州醫(yī)藥. 2017(02)
[4]非結(jié)核分枝桿菌病實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)及藥敏試驗(yàn)研究進(jìn)展[J]. 郭明日,張麗霞. 淮海醫(yī)藥. 2017(02)
[5]貴州省結(jié)核分枝桿菌臨床分離株MIRU-VNTR位點(diǎn)基因分型研究[J]. 孫榮,畢雅坤,歐維正,王燕,秦萬(wàn),蒙俊,陳崢宏. 中國(guó)病原生物學(xué)雜志. 2017(01)
[6]淺談非結(jié)核分枝桿菌肺病的流行及診斷[J]. 劉汝建,王進(jìn). 中國(guó)繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育. 2017(02)
[7]耐多藥結(jié)核分枝桿菌基因位點(diǎn)表達(dá)研究[J]. 戚應(yīng)杰,查曉丹. 實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志. 2016(24)
[8]艾滋病合并非結(jié)核分枝桿菌病研究進(jìn)展[J]. 梁佩佩,盧洪洲. 臨床內(nèi)科雜志. 2016 (10)
[9]非結(jié)核分枝桿菌肺病的診斷與治療研究進(jìn)展[J]. 劉國(guó)威,白大鵬,梅早仙. 中國(guó)城鄉(xiāng)企業(yè)衛(wèi)生. 2016(06)
[10]非結(jié)核分枝桿菌病實(shí)驗(yàn)室診斷專家共識(shí)[J]. 中華結(jié)核和呼吸雜志. 2016 (06)
博士論文
[1]浙江地區(qū)非結(jié)核分枝桿菌在疑似肺結(jié)核患者中的流行研究[D]. 畢晟.浙江大學(xué) 2015
碩士論文
[1]RNA恒溫?cái)U(kuò)增實(shí)時(shí)檢測(cè)技術(shù)鑒定常見致病非結(jié)核分枝桿菌研究[D]. 李園園.蘇州大學(xué) 2014
[2]非結(jié)核分枝桿菌的菌種鑒定、藥敏試驗(yàn)和耐藥機(jī)制的研究[D]. 聶文娟.北京市結(jié)核病胸部腫瘤研究所 2014
[3]應(yīng)用16s rRNA基因序列分析鑒定非典型細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 沈亞娟.重慶醫(yī)科大學(xué) 2012
本文編號(hào)：2903059
【文章來(lái)源】：大理大學(xué)云南省
【文章頁(yè)數(shù)】：66 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
圖1.1分枝桿菌抗酸染色（100×）
圖 1.2 分枝桿菌在中性羅氏培養(yǎng)基上的培養(yǎng)結(jié)果Fig 1.2 The result of Mycobacterium in Neutral Roche medium養(yǎng)基初步菌種鑒定結(jié)果種于 TCH、PNB 和中性羅氏培養(yǎng)基（L-J）后，經(jīng) 4 周培養(yǎng)后，桿菌生長(zhǎng)情況，發(fā)現(xiàn)所有菌株在中性羅氏培養(yǎng)基（L-J）上均生果可以采用。以 NTM 在 PNB/TCH 培養(yǎng)基上均要生長(zhǎng)這一特點(diǎn)養(yǎng)基法將 18 株臨床分離株進(jìn)行初步菌種鑒定，鑒定結(jié)果如表 1. 14 株、人型結(jié)核分枝桿菌 3 株和牛型結(jié)核分枝桿菌 1 株。表 1.4 鑒別培養(yǎng)基的菌種鑒別結(jié)果Table 1.4 The results of identification medium菌種 Strain NTM M.tuberculosis M.bovis鑒定結(jié)果 PNB (+) TCH (+) PNB (－) TCH (+) PNB (－) TCH (－菌株數(shù)（株） 14 3 1
16S rRNA 基因 PCR 擴(kuò)增電泳圖。（M:DL 2000 Marker; H:標(biāo)準(zhǔn)株-7 的 PCR 產(chǎn)物）ification of different strains of 16SrRNA gene (M: Nucleic acid markeains H37Rv; 1-7: PCR products of strains)因的擴(kuò)增及測(cè)序結(jié)果 NTM 的臨床分離株的 hsp65 基因在經(jīng) PCR 擴(kuò)增后，同大小約為 365bp 的 DNA 片段，見圖 1.4，分別回收、測(cè)過(guò)與 GenBank 中的標(biāo)準(zhǔn)序列相比較，可鑒定出膿腫分枝
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]AIDS合并非結(jié)核分枝桿菌肺病的診治進(jìn)展[J]. 黃葵,李勇. 傳染病信息. 2017(02)
[2]非結(jié)核分枝桿菌肺病診治研究進(jìn)展[J]. 黃葵,李勇. 內(nèi)科. 2017(02)
[3]免疫支持對(duì)非結(jié)核分枝桿菌肺病患者療效影響[J]. 江萬(wàn)航,劉國(guó)標(biāo),杜正新,李方知. 廣州醫(yī)藥. 2017(02)
[4]非結(jié)核分枝桿菌病實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)及藥敏試驗(yàn)研究進(jìn)展[J]. 郭明日,張麗霞. 淮海醫(yī)藥. 2017(02)
[5]貴州省結(jié)核分枝桿菌臨床分離株MIRU-VNTR位點(diǎn)基因分型研究[J]. 孫榮,畢雅坤,歐維正,王燕,秦萬(wàn),蒙俊,陳崢宏. 中國(guó)病原生物學(xué)雜志. 2017(01)
[6]淺談非結(jié)核分枝桿菌肺病的流行及診斷[J]. 劉汝建,王進(jìn). 中國(guó)繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育. 2017(02)
[7]耐多藥結(jié)核分枝桿菌基因位點(diǎn)表達(dá)研究[J]. 戚應(yīng)杰,查曉丹. 實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志. 2016(24)
[8]艾滋病合并非結(jié)核分枝桿菌病研究進(jìn)展[J]. 梁佩佩,盧洪洲. 臨床內(nèi)科雜志. 2016 (10)
[9]非結(jié)核分枝桿菌肺病的診斷與治療研究進(jìn)展[J]. 劉國(guó)威,白大鵬,梅早仙. 中國(guó)城鄉(xiāng)企業(yè)衛(wèi)生. 2016(06)
[10]非結(jié)核分枝桿菌病實(shí)驗(yàn)室診斷專家共識(shí)[J]. 中華結(jié)核和呼吸雜志. 2016 (06)
博士論文
[1]浙江地區(qū)非結(jié)核分枝桿菌在疑似肺結(jié)核患者中的流行研究[D]. 畢晟.浙江大學(xué) 2015
碩士論文
[1]RNA恒溫?cái)U(kuò)增實(shí)時(shí)檢測(cè)技術(shù)鑒定常見致病非結(jié)核分枝桿菌研究[D]. 李園園.蘇州大學(xué) 2014
[2]非結(jié)核分枝桿菌的菌種鑒定、藥敏試驗(yàn)和耐藥機(jī)制的研究[D]. 聶文娟.北京市結(jié)核病胸部腫瘤研究所 2014
[3]應(yīng)用16s rRNA基因序列分析鑒定非典型細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 沈亞娟.重慶醫(yī)科大學(xué) 2012
本文編號(hào)：2903059
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