發(fā)布時間：2020-11-22 20:07

　　 目的先天缺牙是一種常見的遺傳性疾病,會導致咀嚼功能紊亂,造成發(fā)音、美觀及社會心理等諸多方面的問題。先天缺牙的病人常常伴發(fā)一系列全身其他疾病,甚至與腫瘤的發(fā)生相關(guān)。研究表明,先天性頜面部發(fā)育不良尤其是牙齒缺失與腫瘤的發(fā)生二者共享相同的基因調(diào)節(jié)信號通路。近年研究證據(jù)提示從先天性牙齒缺失作為出發(fā)點,追蹤和早期發(fā)現(xiàn)腫瘤的發(fā)生成為可能。癌癥的早期診斷是一個有效提高生存質(zhì)量和時間的方法,也具有成本效益。因此,在抗擊癌癥的過程中,尋找生物學或表型的風險標記物具有重要意義。本研究旨在通過對先天缺牙伴腫瘤易感家系致病基因初步鎖定為切入點,研究二者的信號通路或調(diào)節(jié)方式,為腫瘤疾病的基因篩查提供參考。內(nèi)容先天缺牙是指在牙胚形成過程中未能發(fā)育和未能形成牙齒,或是在牙胚發(fā)育早期,即牙蕾形成期的先天性異常。除已明確的綜合征型先天缺牙,很多非綜合征型先天缺牙患者也常伴隨全身其他系統(tǒng)的疾病或發(fā)育異常。本研究通過對一個先天缺牙并伴有腫瘤多發(fā)的家系進行臨床表型的分析和全基因組外顯子的測序,初步探討牙齒先天缺失與全身疾病之間的內(nèi)在聯(lián)系。方法1.先天缺牙伴有全身其他疾病的患者家系臨床資料和血樣采集:對臨床接診過程中發(fā)現(xiàn)的先天缺牙伴全身其他組織器官發(fā)育異�；虬┳�、腫瘤發(fā)生的家系進行包括口頜情況及全身狀況的詳細檢查,必要時于綜合性醫(yī)院或?qū)？漆t(yī)院進行專項檢查,拍攝全景片以明確余留及缺失牙數(shù)、是否有埋伏阻生齒等;詳細追問個人既往史、家族遺傳史等病史資料,繪制家系遺傳學圖譜,進行遺傳特征分析;在符合倫理委員會各項規(guī)定及受檢者知情同意的前提下,抽取所有能取得聯(lián)系的家系成員靜脈外周血標本置于EDTA抗凝管中。2.全外顯子測序:提取全血樣的前基因組DNA,經(jīng)分析檢測DNA降解程度低,無RNA、蛋白質(zhì)等污染,含量在0.6ug以上的合格DNA樣品,經(jīng)PCR線性擴增后文庫質(zhì)檢,符合標準進行下一步測序。3.全外顯子檢測結(jié)果描述和分析:首先進行測序數(shù)據(jù)質(zhì)量評估,測序數(shù)據(jù)量、比對率和錯誤率達到標準,則進行下一步分析,未達到標準的重新建庫或重測序。將符合標準的測序序列人類基因組序列第37版參考基因組(GRCh37)進行比對,篩查樣本中的變異信息,并對篩查出的突變進行統(tǒng)計和注釋。最后,利用已有數(shù)據(jù)庫,通過分析突變的有害性、結(jié)合樣本情況和基于基因功能及表型等方法,過濾出與疾病相關(guān)的有價值的突變位點和(或)基因。結(jié)果1.通過對家系成員進行全身檢查和口腔�？茩z查,結(jié)合基因檢測結(jié)果證實,本研究家系成員的先天缺牙為典型常染色體顯性遺傳方式,伴有明顯的腫瘤易感性。2.先證者及其母親在牙發(fā)育相關(guān)基因DSPP上共有25個突變位點,其中包括23個位于外顯子區(qū)域的8個錯義突變。3.在與腫瘤及牙齒發(fā)育共同致病的基因AXIN-2上共有6個突變位點,有兩個位于外顯子區(qū)域的同義突變。4.發(fā)現(xiàn)新型致病基因ZNF609上有2個突變位點,兩個突變均位于外顯子區(qū)域,其中一個為具有較強致病性的錯義突變。5.AXIN-2以及ZNF609基因上的突變可能是該家系成員腫瘤易感的原因。結(jié)論1、本研究檢測出先證者及其母親在AXIN-2基因上的共同突變,可能與該家族非綜合征型牙齒先天缺失和巨結(jié)腸的發(fā)生有內(nèi)在聯(lián)系;而DSSP基因的突變可能是導致受檢者牙齒先天缺失、余留牙齒形態(tài)異常的潛在原因,其致病機制仍需進一步的研究驗證;AXIN-2基因和DSSP基因?qū)ο忍烊毖赖陌l(fā)生可能存在內(nèi)在的協(xié)同作用,二者的突變共同導致了牙齒發(fā)育異常的發(fā)生。2、本研究結(jié)果可以進一步印證牙齒先天缺失與多種腫瘤的發(fā)生之間可能存在內(nèi)在聯(lián)系。3、先天缺牙可能是未來腫瘤研究中一個極具潛力的風險指標。
【學位單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R782.1;R440
【部分圖文】：

表 1 非綜合征型缺失患者先天缺失恒牙牙位記錄患者及牙弓右側(cè) 左側(cè)8 7 6 5 4 3 2 1 1 2 3 4 5 6 7 8III-4上頜 ★ ★下頜 ☆ ★ ★ ☆ ★II-7上頜 ★ ★ ★下頜 ★ ★表 1：★表示牙齒缺失，☆為乳牙滯留。從表中可看出，先證者 III-4 下頜切牙缺失，除右側(cè)第三磨牙外第三磨牙全部缺失，側(cè)切牙為乳牙滯留；II-7 左側(cè)上頜第二磨牙缺失，全部第三磨牙缺失。

圖 3 II-4（先證者母親）口腔曲面體層片圖 2：先證者母親 II-7 輕中度牙周炎，先天缺失 5 顆恒牙（包括第三磨牙）。2. 基因組全外顯子測序及生物信息分析結(jié)果2.1 測序深度、覆蓋度分布有效測序數(shù)據(jù)通過一款基于 BWT 的快速比對工具 BWA 比對到人類基因組序列第 37 版參考基因組（The Genome Reference Consortium Human GenomeBuild，GRCh37），得到更節(jié)約空間，計算機機可讀的 bam 格式的生物信息二進制文件。然后，用基于操作 sam 和 bam 文件格式的工具合集 SAMtools 對最初的比對結(jié)果進行排序；再用 Picard 標記重復 reads（mark duplicate reads）。最后，

測序深度圖4：左圖為不同測序深度的堿基比例，右圖為不同深度上的累積堿基比例
【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前4條

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2 徐秀敏;梅陵宣;;axin-2與牙發(fā)育的關(guān)系[J];國際口腔醫(yī)學雜志;2008年06期

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相關(guān)博士學位論文 前1條

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本文編號：2894635