發(fā)布時間：2018-06-18 10:09

  本文選題：腦卒中 + MCAO/R�。� 參考：《皖南醫(yī)學(xué)院》2017年碩士論文

【摘要】：目的:探討Rac1及Nox1在大鼠大腦中動脈缺血再灌注(Middle Cerebral Artery Ischemia-Reperfusion,MCAO/R)損傷中通過氧化應(yīng)激途徑參與缺血再灌注損傷的作用機制。方法:本實驗采用SD雄性大鼠70只,隨機分為假手術(shù)組(n=5)及MCAO/R組(n=65),MCAO/R組用改良的Zea-Longa法制作大鼠大腦中動脈缺血再灌注損傷模型。造模后采用Longa評分法對大鼠神經(jīng)行為學(xué)進行評分,觀察大鼠神經(jīng)功能缺損。分別于再灌注3h、6h、12h、24h、2d、3d、5d、7d后斷頭處死大鼠,取腦組織用0.2%TTC染液進行染色。測量不同時間組腦梗死體積百分比,觀察MCAO/R損傷模型的穩(wěn)定性。造模穩(wěn)定后分別于再灌注3h、6h、12h、24h、2d、3d、5d、7d將大鼠處死,斷頸取腦組織。采用HE染色觀察腦組織缺血再灌注損傷后的形態(tài)學(xué)改變,然后采用免疫組織化學(xué)法和Western-Blot技術(shù)檢測Rac1、Nox1蛋白的表達。對檢測結(jié)果進行統(tǒng)計分析,比較Rac1、Nox1蛋白在各組腦組織中的表達差異及其二者表達的規(guī)律性。結(jié)果:1.TTC染色結(jié)果顯示再灌注不同時間大鼠腦梗死體積百分比呈現(xiàn)一定的規(guī)律,隨再灌注時的延長(12h~3d)腦梗死體積百分比逐漸增加(P0.05),5d~7d后逐漸降低(P0.05)。2.顯微鏡下觀察HE染色結(jié)果顯示,與假手術(shù)組比較,再灌注3h和6h出現(xiàn)神經(jīng)細胞腫脹改變,再灌注12h-3d神經(jīng)細胞發(fā)生不同程度的損傷、壞死、崩解、消失,紅細胞散在分布于血管周圍腦組織中,再灌注5d組腦組織梗死區(qū)可見神經(jīng)元數(shù)量減少,膠質(zhì)細胞增生,血管壁炎性細胞浸潤,再灌注7d組毛細血管內(nèi)皮細胞增生、出芽形成新生毛細血管。3.免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果顯示,缺血再灌注損傷后Rac1蛋白主要在神經(jīng)細胞胞核中表達呈強陽性,Nox1蛋白主要在神經(jīng)元及血管內(nèi)皮細胞上表達。與假手術(shù)組比較,海馬Rac1于再灌注3h出現(xiàn)陽性表達,再灌注24h達到高峰后開始下降(P0.05);皮質(zhì)Rac1于再灌注6h出現(xiàn)陽性表達,再灌注2d達到高峰后下降(P0.05);海馬部位Nox1蛋白陽性表達明顯較皮質(zhì)部位低,海馬部位于再灌注24h Nox1蛋白陽性表達增加,再灌注24h后降低;皮質(zhì)部位于再灌注6h Nox1蛋白陽性表達上升,再灌注6h后逐漸下降,再灌注5~7d后Nox1蛋白表達逐漸上升(P0.05)。實驗結(jié)果表明,Rac1及Nox1蛋白表達在空間上具有特異性,且海馬部位Rac1蛋白陽性表達較皮質(zhì)部位Rac1蛋白出現(xiàn)的早,海馬部位Rac1蛋白陽性表達較Nox1蛋白出現(xiàn)的早。4.Western-Blot檢測結(jié)果提示MCAO/R組Rac1蛋白較假手術(shù)組表達上調(diào),且海馬及皮質(zhì)部位Rac1蛋白的表達均隨再灌注時間的延長逐漸上升,達高峰后又逐漸下降,但皮質(zhì)部位Rac1蛋白的表達晚于海馬。與假手術(shù)組比較,海馬部位Nox1蛋白在再灌注24h表達量顯著增高,其余時間組表達水平差異并不明顯,但均較假手術(shù)組表達量增高。再灌注后皮質(zhì)部位Nox1蛋白于再灌注6h驟然上升,再灌注6h后逐漸下降至正常水平以下,再灌注5~7d后皮質(zhì)部位Nox1蛋白表達逐漸上升(P0.05)。結(jié)論:1.根據(jù)TTC染色梗死體積百分比判斷MCAO/R造模的穩(wěn)定性,發(fā)現(xiàn)梗死體積百分比可能隨著再灌注時間的延長先上升后下降的趨勢。2.以假手術(shù)組為對照,大鼠腦缺血再灌注損傷后組織形學(xué)主要為神經(jīng)細胞損傷、凋亡、壞死及水腫等改變。3.與假手術(shù)組對比,缺血再灌注損傷后Rac1蛋白主要在神經(jīng)細胞胞核中表達呈強陽性,Nox1蛋白主要在神經(jīng)元及血管內(nèi)皮細胞中表達,大鼠大腦缺血再灌注損傷后Nox1蛋白及Rac1蛋白表達在空間上具有特異性,且隨著再灌注時間的延長出現(xiàn)Nox1蛋白表達隨Rac1蛋白表達增加而上升的趨勢,Rac1可能是Nox1蛋白表達的重要調(diào)控因子,其通過調(diào)控Nox1生成氧自由基參與缺血再灌注后氧化應(yīng)激過程。4.皮質(zhì)部位Nox1蛋白于再灌注早期表達先增加后降低而再灌注晚期又上升的趨勢表明Nox1蛋白不僅僅參與到再灌注早期腦組織損傷的過程,還可能參與到缺血再灌注損傷后期腦組組損傷修復(fù)的過程當(dāng)中。研究腦卒中缺血再灌注損傷的發(fā)生發(fā)展過程,對缺血再灌注損傷的理論研究及臨床治療藥物的研發(fā)有非常重要的意義。
[Abstract]:Objective : To investigate the effect of Rac1 and Nox1 on ischemia - reperfusion injury by oxidative stress pathway in middle cerebral ischemia - reperfusion injury . The rats were sacrificed at 3h , 6h , 12h , 24h , 2d , 3d , 5d and 7d after reperfusion . Compared with sham operation group , the expression of Nox1 protein in cerebral ischemia - reperfusion injury increased gradually after reperfusion for 6 hours .
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：D919

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本文編號：2035112