本文選題：腦卒中 + MCAO/R　； 參考：《皖南醫(yī)學(xué)院》2017年碩士論文

【摘要】：目的:探討Rac1及Nox1在大鼠大腦中動(dòng)脈缺血再灌注(Middle Cerebral Artery Ischemia-Reperfusion,MCAO/R)損傷中通過氧化應(yīng)激途徑參與缺血再灌注損傷的作用機(jī)制。方法:本實(shí)驗(yàn)采用SD雄性大鼠70只,隨機(jī)分為假手術(shù)組(n=5)及MCAO/R組(n=65),MCAO/R組用改良的Zea-Longa法制作大鼠大腦中動(dòng)脈缺血再灌注損傷模型。造模后采用Longa評分法對大鼠神經(jīng)行為學(xué)進(jìn)行評分,觀察大鼠神經(jīng)功能缺損。分別于再灌注3h、6h、12h、24h、2d、3d、5d、7d后斷頭處死大鼠,取腦組織用0.2%TTC染液進(jìn)行染色。測量不同時(shí)間組腦梗死體積百分比,觀察MCAO/R損傷模型的穩(wěn)定性。造模穩(wěn)定后分別于再灌注3h、6h、12h、24h、2d、3d、5d、7d將大鼠處死,斷頸取腦組織。采用HE染色觀察腦組織缺血再灌注損傷后的形態(tài)學(xué)改變,然后采用免疫組織化學(xué)法和Western-Blot技術(shù)檢測Rac1、Nox1蛋白的表達(dá)。對檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,比較Rac1、Nox1蛋白在各組腦組織中的表達(dá)差異及其二者表達(dá)的規(guī)律性。結(jié)果:1.TTC染色結(jié)果顯示再灌注不同時(shí)間大鼠腦梗死體積百分比呈現(xiàn)一定的規(guī)律,隨再灌注時(shí)的延長(12h~3d)腦梗死體積百分比逐漸增加(P0.05),5d~7d后逐漸降低(P0.05)。2.顯微鏡下觀察HE染色結(jié)果顯示,與假手術(shù)組比較,再灌注3h和6h出現(xiàn)神經(jīng)細(xì)胞腫脹改變,再灌注12h-3d神經(jīng)細(xì)胞發(fā)生不同程度的損傷、壞死、崩解、消失,紅細(xì)胞散在分布于血管周圍腦組織中,再灌注5d組腦組織梗死區(qū)可見神經(jīng)元數(shù)量減少,膠質(zhì)細(xì)胞增生,血管壁炎性細(xì)胞浸潤,再灌注7d組毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞增生、出芽形成新生毛細(xì)血管。3.免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果顯示,缺血再灌注損傷后Rac1蛋白主要在神經(jīng)細(xì)胞胞核中表達(dá)呈強(qiáng)陽性,Nox1蛋白主要在神經(jīng)元及血管內(nèi)皮細(xì)胞上表達(dá)。與假手術(shù)組比較,海馬Rac1于再灌注3h出現(xiàn)陽性表達(dá),再灌注24h達(dá)到高峰后開始下降(P0.05);皮質(zhì)Rac1于再灌注6h出現(xiàn)陽性表達(dá),再灌注2d達(dá)到高峰后下降(P0.05);海馬部位Nox1蛋白陽性表達(dá)明顯較皮質(zhì)部位低,海馬部位于再灌注24h Nox1蛋白陽性表達(dá)增加,再灌注24h后降低;皮質(zhì)部位于再灌注6h Nox1蛋白陽性表達(dá)上升,再灌注6h后逐漸下降,再灌注5~7d后Nox1蛋白表達(dá)逐漸上升(P0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,Rac1及Nox1蛋白表達(dá)在空間上具有特異性,且海馬部位Rac1蛋白陽性表達(dá)較皮質(zhì)部位Rac1蛋白出現(xiàn)的早,海馬部位Rac1蛋白陽性表達(dá)較Nox1蛋白出現(xiàn)的早。4.Western-Blot檢測結(jié)果提示MCAO/R組Rac1蛋白較假手術(shù)組表達(dá)上調(diào),且海馬及皮質(zhì)部位Rac1蛋白的表達(dá)均隨再灌注時(shí)間的延長逐漸上升,達(dá)高峰后又逐漸下降,但皮質(zhì)部位Rac1蛋白的表達(dá)晚于海馬。與假手術(shù)組比較,海馬部位Nox1蛋白在再灌注24h表達(dá)量顯著增高,其余時(shí)間組表達(dá)水平差異并不明顯,但均較假手術(shù)組表達(dá)量增高。再灌注后皮質(zhì)部位Nox1蛋白于再灌注6h驟然上升,再灌注6h后逐漸下降至正常水平以下,再灌注5~7d后皮質(zhì)部位Nox1蛋白表達(dá)逐漸上升(P0.05)。結(jié)論:1.根據(jù)TTC染色梗死體積百分比判斷MCAO/R造模的穩(wěn)定性,發(fā)現(xiàn)梗死體積百分比可能隨著再灌注時(shí)間的延長先上升后下降的趨勢。2.以假手術(shù)組為對照,大鼠腦缺血再灌注損傷后組織形學(xué)主要為神經(jīng)細(xì)胞損傷、凋亡、壞死及水腫等改變。3.與假手術(shù)組對比,缺血再灌注損傷后Rac1蛋白主要在神經(jīng)細(xì)胞胞核中表達(dá)呈強(qiáng)陽性,Nox1蛋白主要在神經(jīng)元及血管內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá),大鼠大腦缺血再灌注損傷后Nox1蛋白及Rac1蛋白表達(dá)在空間上具有特異性,且隨著再灌注時(shí)間的延長出現(xiàn)Nox1蛋白表達(dá)隨Rac1蛋白表達(dá)增加而上升的趨勢,Rac1可能是Nox1蛋白表達(dá)的重要調(diào)控因子,其通過調(diào)控Nox1生成氧自由基參與缺血再灌注后氧化應(yīng)激過程。4.皮質(zhì)部位Nox1蛋白于再灌注早期表達(dá)先增加后降低而再灌注晚期又上升的趨勢表明Nox1蛋白不僅僅參與到再灌注早期腦組織損傷的過程,還可能參與到缺血再灌注損傷后期腦組組損傷修復(fù)的過程當(dāng)中。研究腦卒中缺血再灌注損傷的發(fā)生發(fā)展過程,對缺血再灌注損傷的理論研究及臨床治療藥物的研發(fā)有非常重要的意義。
[Abstract]:Objective : To investigate the effect of Rac1 and Nox1 on ischemia - reperfusion injury by oxidative stress pathway in middle cerebral ischemia - reperfusion injury . The rats were sacrificed at 3h , 6h , 12h , 24h , 2d , 3d , 5d and 7d after reperfusion . Compared with sham operation group , the expression of Nox1 protein in cerebral ischemia - reperfusion injury increased gradually after reperfusion for 6 hours .
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：D919

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本文編號：2035112