發(fā)布時(shí)間：2020-10-23 01:30

　　 目的:三丁基錫(tributyltin,TBT)是一種常見的有機(jī)錫類化合物,可作為木材防腐劑、船體防污劑而被廣泛使用。作為常見的環(huán)境內(nèi)分泌干擾物,TBT對海洋生物和哺乳動(dòng)物造成嚴(yán)重危害,主要涉及生殖、神經(jīng)、免疫、內(nèi)分泌和肝臟等毒性。作為人體主要的代謝解毒器官,肝臟也是TBT的靶器官。本課題組前期選用人正常肝臟來源的細(xì)胞系HL7702細(xì)胞,應(yīng)用基因組學(xué)技術(shù)對TBT的肝毒性機(jī)制進(jìn)行了系統(tǒng)研究,發(fā)現(xiàn)TBT引起的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可能是TBT致肝毒性的重要原因。在此基礎(chǔ)上,本研究將應(yīng)用高通量的蛋白組學(xué)技術(shù)對TBT引起肝細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激進(jìn)行深入探索,以期進(jìn)一步闡明TBT誘導(dǎo)肝細(xì)胞損傷的機(jī)制。方法:1.用MTT法檢測HL7702細(xì)胞暴露于不同濃度的TBT(0、2、4、6、8、10μM)2h后細(xì)胞增殖活力。2.HL7702細(xì)胞暴露于TBT后提取總蛋白,用標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組i TRAQ?檢測所有蛋白的表達(dá)水平。3.用Proteinpilot軟件進(jìn)行蛋白質(zhì)定性和定量分析,篩選出TBT暴露組相對于對照組的差異表達(dá)蛋白。4.對蛋白組學(xué)中發(fā)現(xiàn)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)的基因進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR驗(yàn)證。5.運(yùn)用蛋白免疫印跡技術(shù)對蛋白質(zhì)組學(xué)結(jié)果中發(fā)現(xiàn)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)差異表達(dá)蛋白進(jìn)行驗(yàn)證。6.透射電鏡下檢測不同濃度TBT處理HL7702細(xì)胞2h后,細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)形態(tài)的變化。結(jié)果:1.TBT暴露影響HL7702細(xì)胞的存活和增殖,并且表現(xiàn)出低濃度毒物促進(jìn)細(xì)胞增殖,高濃度毒物抑制細(xì)胞增殖的趨勢。2.根據(jù)蛋白質(zhì)組實(shí)驗(yàn),細(xì)胞暴露于低濃度(2μM)、中濃度(6μM)、高濃度(10μM)的TBT后分別出現(xiàn)349、598、801個(gè)差異表達(dá)蛋白。3.蛋白質(zhì)組結(jié)果的KEGG通路分析結(jié)果表明,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是TBT肝毒性的主要原因。4.對蛋白質(zhì)組篩選得到的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)基因用q RT-PCR進(jìn)行驗(yàn)證,變化趨勢與蛋白組學(xué)結(jié)果一致。5.對蛋白質(zhì)組篩選得到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白用Western Blot進(jìn)行驗(yàn)證,變化趨勢與蛋白組學(xué)結(jié)果一致。6.電鏡下可以看到低濃度TBT處理的實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞核固縮、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔擴(kuò)張、核糖體脫落,表明內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激發(fā)生,隨著染毒濃度的進(jìn)一步升高,細(xì)胞死亡解體。結(jié)論:蛋白質(zhì)組分析結(jié)果表明內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是TBT肝毒性作用的主要原因。ATF6、PERK、IRE1三種感受蛋白介導(dǎo)的未折疊蛋白反應(yīng)通路全部參與了TBT誘導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。
【學(xué)位單位】：寧波大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R114
【部分圖文】：

iTRAQ操作流程圖

圖 3.1 TBT 對 HL7702 細(xì)胞增殖的影響Fig.3.1 Cell viability after HL7702 cells treated with TBT(*P<0.05，**P<0.01) 蛋白組學(xué)聚類分析對差異表達(dá)的蛋白進(jìn)行聚類分析，得到一張熱圖。圖中綠色表示各基因表降，紅色代表各基因表達(dá)水平上升，黑色代表各基因表達(dá)水平不變。結(jié)果聚類良好，其中中濃度組與高濃度組表達(dá)情況接近。

24圖 3.2 蛋白聚類分析Fig.3.2 Protein cluster analysis3.3 蛋白質(zhì)組結(jié)果3.3.1 蛋白質(zhì)組結(jié)果總體情況根據(jù)可信蛋白篩選標(biāo)準(zhǔn)：Unused > 1.3 且 peptides（肽段數(shù)）大于等于 2 條，去除反庫數(shù)據(jù)以及比值為空白的無效值。根據(jù)差異表達(dá)蛋白篩選標(biāo)準(zhǔn)：Foldchange 為1.5 倍，即倍數(shù)變化大于 1.5 或小于 0.67，直接采用兩比較組樣品幾次重復(fù)的相對定量值的的平均值進(jìn)行計(jì)算。并且 Dynamics 中進(jìn)行了動(dòng)態(tài)分析，對同一蛋白在不同比較組中進(jìn)行了分析，在任意一組中為差異蛋白的蛋白均被列出。最終得到：可信蛋
【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 加貝;應(yīng)用電子捕獲檢測器氣相色譜及質(zhì)譜測定魚體中的三丁基錫[J];國外醫(yī)學(xué)(衛(wèi)生學(xué)分冊);1989年01期

2 楊梅英;吳元輝;;順丁烯二酸甲基三丁基錫的合成和性能的研究[J];福建師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);1989年04期

3 李錦光;梁旭方;郁穎;李觀貴;李光照;;斜帶石斑魚三丁基錫結(jié)合蛋白基因的克隆與分析[J];暨南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)與醫(yī)學(xué)版);2010年05期

4 肖湘,韓雅莉,徐淑暖,李興暖,黃長江;氯化三丁基錫對牡蠣抗氧化作用的影響[J];食品科學(xué);2003年05期

5 張曉紅;;三丁基錫與海洋環(huán)境[J];環(huán)境保護(hù);1993年10期

6 陸賢昆，李靜，王臻，劉倩;幾種海洋微藻對水中三丁基錫化合物的遷移和轉(zhuǎn)化作用[J];環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào);1994年03期

7 陳甫華;張相如;張仁江;;海洋環(huán)境中三丁基錫的降解[J];環(huán)境科學(xué)進(jìn)展;1994年02期

8 肖湘,韓雅莉,李興暖,黃長江;三丁基錫對牡蠣超氧化物歧化酶的影響[J];臺灣海峽;2002年04期

9 尹漢東,馬春林;氨荒酸三丁基錫配合物的合成及生物活性初步研究[J];化學(xué)試劑;2000年03期

10 張寶東，張清敏，張毓琪，陳敘龍;氯化三丁基錫對鯉魚肝胰臟線粒體的影響[J];交通環(huán)保;1995年02期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前7條

1 楊錄軍;甲氧化三丁基錫多終點(diǎn)遺傳毒性評價(jià)和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2006年

2 劉慧剛;天然植物有效成份茶多酚和大蒜素拮抗三丁基錫毒性作用效果的研究及機(jī)制的探討[D];浙江大學(xué);2007年

3 柳英霞;食品中不同形態(tài)的有機(jī)錫化合物同時(shí)分析新方法研究[D];南昌大學(xué);2015年

4 任穎;幾種重要有機(jī)催化合成反應(yīng)的量子化學(xué)研究[D];山西師范大學(xué);2012年

5 鄢緋寰;三丁基錫對雄性小鼠精子發(fā)生和成熟的影響[D];廈門大學(xué);2008年

6 王云;苯并（a）芘、三丁基錫及其混合物對褐菖鲉的毒性效應(yīng)[D];廈門大學(xué);2007年

7 施華宏;中國沿海海產(chǎn)腹足類性畸變及有機(jī)錫污染的生物監(jiān)測[D];暨南大學(xué);2003年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 豐梅;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在三丁基錫誘導(dǎo)肝細(xì)胞損傷中的機(jī)制研究[D];寧波大學(xué);2018年

2 木偉娜;低劑量三丁基錫和鎘聯(lián)合暴露對鯉魚甲狀腺軸及抗氧化指標(biāo)的影響[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

3 周密;三丁基錫肝細(xì)胞毒性的轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究[D];寧波大學(xué);2017年

4 王蕾;三丁基錫對非洲爪蟾和紅鯽的毒性效應(yīng)[D];華東師范大學(xué);2008年

5 蘇小霞;氯化三丁基錫對SD大鼠生殖發(fā)育毒性及機(jī)制的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2008年

6 徐文菊;三丁基錫和菲對魚類的毒性效應(yīng)研究[D];汕頭大學(xué);2008年

7 譚燕;三丁基錫對孔雀魚的毒性效應(yīng)研究[D];汕頭大學(xué);2006年

8 涂巍巍;微絲相關(guān)的三丁基錫毒性機(jī)理研究[D];寧波大學(xué);2015年

9 辛全兵;圍產(chǎn)期低劑量氯化三丁基錫暴露對子代雄性小鼠的內(nèi)分泌干擾作用及其機(jī)制初探[D];山東大學(xué);2013年

10 張麗笑;膠州灣丁基錫污染狀況調(diào)查及三丁基錫對常見微藻的毒性研究[D];中國海洋大學(xué);2010年

本文編號：2852368