發(fā)布時(shí)間：2020-10-22 15:22

　　 多不飽和脂肪酸作為機(jī)體不可或缺的必需脂肪酸,參與許多生理活動(dòng)的調(diào)控,其廣泛的生物學(xué)功能成為研究熱點(diǎn)。大量證據(jù)表明,多不飽和脂肪酸不僅能夠調(diào)節(jié)脂類(lèi)代謝、提高機(jī)體免疫功能、預(yù)防心血管疾病,同時(shí)還能夠促進(jìn)機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育。隨著人們生活水平的不斷提高,飲食習(xí)慣越來(lái)越趨向于西方化的高脂膳食,大量臨床研究表明,過(guò)量攝入膳食脂肪在引發(fā)肥胖以及脂代謝紊亂的同時(shí),對(duì)女性生殖健康造成影響。另外,本課題組前期的研究發(fā)現(xiàn)補(bǔ)充多不飽和脂肪酸的高脂飲食對(duì)雄性小鼠精子生成與精子活力有顯著促進(jìn)作用,然而,對(duì)于補(bǔ)充ω-3多不飽和脂肪酸的高脂飲食對(duì)雌性小鼠卵巢功能有何影響仍不明確。因此,我們以C57BL/6J雌鼠為動(dòng)物模型進(jìn)行了以下研究:目的:研究補(bǔ)充ω-3多不飽和脂肪酸的高脂飲食對(duì)小鼠卵巢功能的影響。方法:8周齡雌性C57BL/6J小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組(CON)、高脂組(HFD)和ω-3 PUFA組(HFFO),每組12只,對(duì)照組喂食基礎(chǔ)飼料,高脂組喂食60%高脂飼料,ω-3 PUFA組喂食5%魚(yú)油加60%高脂飼料。(1)每周記錄小鼠體重;(2)通過(guò)陰道脫落細(xì)胞檢查來(lái)監(jiān)測(cè)小鼠動(dòng)情周期;(3)造模結(jié)束前一周檢測(cè)小鼠葡萄糖耐受情況;(4)小鼠生殖實(shí)驗(yàn):將飲食干預(yù)28周的雌鼠與性成熟的雄性C57BL/6J小鼠以1:1的比例進(jìn)行交配,觀察小鼠生育情況。(5)利用ELISA試劑盒檢測(cè)血清中卵泡刺激素、黃體生成素、雌激素和睪酮等激素水平變化;(6)采用Real-time PCR和Western blot以及免疫組化方法檢測(cè)相關(guān)激素受體基因及蛋白的表達(dá)變化;(7)利用病理組織染色觀察小鼠卵巢組織的形態(tài)學(xué)變化、卵泡發(fā)育情況,并進(jìn)行卵泡計(jì)數(shù);(8)利用TUNEL染色檢測(cè)卵巢組織卵泡凋亡。(9)利用16S-rDNA高通量測(cè)序技術(shù)分析腸道微生物組成及其變化。結(jié)果:(1)體重結(jié)果:飲食干預(yù)5周后,HFD組小鼠體重顯著高于基礎(chǔ)飲食組,飲食干預(yù)8周后,HFFO組小鼠體重顯著高于基礎(chǔ)飲食組;飲食干預(yù)18周后,HFFO組小鼠體重顯著低于HFD組。(2)糖耐量比較:HFD和HFFO組小鼠的空腹血糖顯著高于CON組,而HFFO組的空腹血糖水平明顯低于HFD組;與CON組相比,HFD和HFFO組均出現(xiàn)了葡萄糖不耐受情況,且AUC顯著升高,空腹血清胰島素水平也顯著升高。(3)動(dòng)情周期情況:與CON組相比,HFD組小鼠動(dòng)情前期減少,補(bǔ)充FO增加了高脂飲食誘導(dǎo)的動(dòng)情前期數(shù),且相同時(shí)間內(nèi)周期循環(huán)數(shù)顯著高于HFD組。(4)生殖情況:HFD組小鼠懷孕率和產(chǎn)仔數(shù)顯著低于CON組和HFFO組。(5)生殖激素水平比較:高脂飲食干預(yù)下,小鼠血清中E_2水平顯著降低,FSH、LH、睪酮水平顯著升高;與HFD組相比,HFFO組FSH、LH水平顯著降低。(6)基因表達(dá):高脂飲食干預(yù)下,小鼠卵巢組織中FSHR和LHR蛋白表達(dá)顯著降低,補(bǔ)充FO組與CON組無(wú)顯著差異;與HFD組相比,HFFO組Lhr mRNA水平顯著升高。(7)組織形態(tài)變化:CON組卵巢組織形態(tài)正常,細(xì)胞核清晰可見(jiàn),周?chē)�顆粒細(xì)胞排列整齊致密;高脂飲食干預(yù)下,小鼠卵巢中顆粒細(xì)胞排列松散、紊亂,細(xì)胞層數(shù)減少,間質(zhì)增生,閉鎖卵泡顯著增多;相較于HFD組,HFFO組閉鎖卵泡減少。(8)TUNEL結(jié)果:高脂飲食干預(yù)下,小鼠卵巢組織卵泡凋亡增加,補(bǔ)充FO緩解了卵泡凋亡。(9)高脂飲食及補(bǔ)充FO改變了小鼠腸道微生物組成,并且補(bǔ)充FO顯著降低了疣微菌門(mén)的相對(duì)豐富度。結(jié)論:高脂飲食導(dǎo)致小鼠肥胖,FSH、LH和睪酮水平升高以及雌激素水平降低,伴隨動(dòng)情周期的紊亂,影響了小鼠卵巢的功能,致使小鼠不孕;補(bǔ)充ω-3 PUFAs對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖有改善作用,影響性激素水平,改善動(dòng)情周期紊亂程度,增加高脂飲食干預(yù)下小鼠的懷孕率,改善了高脂飲食對(duì)卵巢功能的影響。補(bǔ)充ω-3 PUFAs改變了高脂飲食干預(yù)下小鼠的腸道微生物組成。
【學(xué)位單位】：華南理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類(lèi)】：R151
【部分圖文】：

圖 2.2-1 小鼠陰道脫落細(xì)胞涂片驗(yàn)7 周后，于實(shí)驗(yàn)前一天晚上 20:00 至次日早上 8:00，移驗(yàn)開(kāi)始前先稱(chēng)量每組小鼠體重并記錄，并從尾巴取血 體重劑量灌胃 20%葡萄糖注射液，分別于 15、30、6值并記錄。實(shí)驗(yàn)8 周后，觀察小鼠所處動(dòng)情周期，當(dāng)小鼠處于動(dòng)情前期常的雄鼠，按 1：1 進(jìn)行合籠，并于次日早上 8:00 檢測(cè)道栓時(shí)，將雄鼠移出，若無(wú)陰道栓則繼續(xù)合籠，并記錄鼠懷孕則為可孕母鼠，不再繼續(xù)合籠；若連續(xù) 20 天合三次，計(jì)算交配率及懷孕率。

圖 3-1 不同飲食干預(yù)對(duì)小鼠體重的影響a.各組小鼠體重增長(zhǎng)曲線，橫坐標(biāo)為干預(yù)時(shí)間周數(shù)，縱坐標(biāo)為小鼠體質(zhì)量數(shù)，相比*p﹤0.05，** p﹤0.01，*** p﹤0.001，**** p﹤0.0001；HFD 組與 HFFO#p﹤0.05，## p﹤0.01。b.造模結(jié)束各組小鼠體重增加量，縱坐標(biāo)為體重增加量間相比較** p﹤0.01，*** p﹤0.001，**** p﹤0.0001。所有數(shù)值用 X±S.E.M 表3.2.2 ω-3 PUFAs 對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)小鼠糖耐量的影響為了評(píng)估飲食干預(yù)后，小鼠對(duì)葡萄糖的調(diào)節(jié)能力，我們對(duì)不同飲食條件下耐量情況進(jìn)行了檢測(cè)，發(fā)現(xiàn) HFD 組與 HFFO 組小鼠的空腹血糖均顯著高于 CHFFO 組小鼠的空腹血糖顯著低于 HFD 組（圖 3-2a），說(shuō)明 ω-3 PUFAs 能在一加空腹?fàn)顟B(tài)下機(jī)體對(duì)葡糖糖的調(diào)節(jié)能力；有趣的是，我們發(fā)現(xiàn)在給予葡萄糖 HFFO 組小鼠的血糖水平顯著高于 HFD 組，但在 60min 時(shí)恢復(fù)到與 HFD 組相負(fù)荷 30min 以后 FO 才對(duì)葡萄糖的調(diào)節(jié)作用顯著，然而在 120min 后這兩組小

糖的調(diào)控能力越弱[126]，結(jié)果顯示，HFD和HFFO組AUC值均顯著高于CON組（圖3-2c），說(shuō)明高脂飲食導(dǎo)致小鼠對(duì)葡萄糖負(fù)荷下血糖的調(diào)節(jié)能力較弱，而且補(bǔ)充 FO 沒(méi)有明顯改善糖耐量異常，可能是 ω-3 PUFAs 的代謝產(chǎn)物使得糖脂代謝的過(guò)程受到了抑制而引起機(jī)體糖代謝異常，具體機(jī)制尚不清楚，有待進(jìn)一步的研究。另外，我們檢測(cè)了小鼠空腹血清胰島素水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HFD 組和 HFFO 組小鼠血清中胰島素水平顯著高于 CON 組，對(duì)胰島素敏感性降低，HFFO 組小鼠血清中胰島素水平相比 HFD 組稍有改善
【參考文獻(xiàn)】

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2 周燦權(quán);古芳;;重視卵巢儲(chǔ)備功能減退與卵巢早衰對(duì)女性健康的影響[J];中國(guó)實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志;2015年08期

3 陳莞蘇;施艷秋;;卵巢早衰病因病機(jī)及中醫(yī)治療研究概況[J];遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2014年12期

4 呂群;何東杰;;卵巢早衰的病因及治療進(jìn)展[J];現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué);2014年03期

5 葉娜;董曉英;李冬華;;卵巢早衰的顆粒細(xì)胞凋亡機(jī)制研究進(jìn)展[J];首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2014年03期

6 滕秀香;李培培;;補(bǔ)腎疏肝祛濕法治療卵巢早衰妊娠成功1例[J];中國(guó)臨床醫(yī)生;2014年05期

7 謝江燕;趙儷梅;東亞君;何畏;;卵巢早衰的免疫學(xué)研究進(jìn)展[J];實(shí)用婦產(chǎn)科雜志;2013年04期

8 唐淮云;湯麗莎;;卵巢早衰的相關(guān)研究進(jìn)展[J];疑難病雜志;2012年03期

9 鐘榮珍;高艷霞;李秋鳳;曹玉鳳;李建國(guó);;飼糧全棉籽比例對(duì)奶牛泌乳性能及乳脂脂肪酸組成的影響[J];動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào);2012年04期

10 周同永;任飛;鄧?yán)?皮立;韓發(fā);席梅;任利平;;γ-亞麻酸及其生理生化功能研究進(jìn)展[J];貴州農(nóng)業(yè)科學(xué);2011年03期

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2 李鵬利;卵巢早衰發(fā)病相關(guān)因素的調(diào)查[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2012年

本文編號(hào)：2851769