發(fā)布時間：2020-11-07 07:14

　　 目的利用細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(Extracellular signal regulates kinase,ERK)抑制劑FR180204抑制卵巢顆粒細(xì)胞胰島素信號通路絲裂原活化蛋白激酶(Mitosis actived protein kinase,MAPK)/ERK通路,研究多囊卵巢綜合征(Polycystic ovary syndrome,PCOS)患者血管內(nèi)皮生長因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)過度表達(dá)與胰島素通路MAPK/ERK通路異常激活的關(guān)系,從分子水平探討PCOS的發(fā)生機(jī)制。方法收集2017年4月-7月期間于青島大學(xué)附屬醫(yī)院生殖中心行人工助孕的PCOS患者和正常對照組患者各20例取卵日卵泡黃素化顆粒細(xì)胞,并進(jìn)行提純培養(yǎng),其中PCOS患者顆粒細(xì)胞均分2份,分種于2瓶(A、B),所有A瓶中均加入指定的ERK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制劑FR180204 5μL處理作為PCOS+IN組,B瓶加入5μLDMSO(配制FR180204溶劑)為PCOS組,對照組加入5μLDMSO為N-PCOS組。采用Western blot方法測定各組顆粒細(xì)胞ERK磷酸化和VEGF的表達(dá)程度。結(jié)果(1)對PCOS組與對照組患者的年齡、不孕年限、體重指數(shù)(BMI)、基礎(chǔ)雌二醇(bE_2)、卵泡刺激素(bFSH)、泌乳素(bPRL)、促性腺激素藥物(gonadotropin,Gn)啟動量、Gn總用量方面指標(biāo)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)與正常對照組相比,PCOS組的基礎(chǔ)促黃體生成激素(bLH)、睪酮(bT)、獲卵數(shù)明顯更高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(3)比較PCOS組、N-PCOS組及PCOS+IN組ERK磷酸化程度及VEGF的表達(dá)量。PCOS組患者的ERK絲氨酸磷酸化程度及VEGF表達(dá)情況均較N-PCOS組高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);FR180204處理后PCOS+IN組ERK絲氨酸磷酸化程度及VEGF表達(dá)情況均較PCOS組降低,差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),但仍高于N-PCOS組。結(jié)論P(yáng)COS患者卵巢顆粒細(xì)胞應(yīng)用MAPK/ERK通道特異性阻滯劑FR180204后,ERK絲氨酸磷酸化下降,VEGF表達(dá)水平下降,提示阻滯MAPK/ERK通路后,VEGF過度表達(dá)情況得到改善。推測PCOS患者卵巢局部過度表達(dá)VEGF與MAPK/ERK通路異常激活相關(guān)。意義PCOS患者卵巢顆粒細(xì)胞過度表達(dá)VEGF,可能與胰島素通路MAPK/ERK異常激活有關(guān)。增多的VEGF可能參與并推動了PCOS的一系列病理變化。目前,多數(shù)學(xué)者認(rèn)為胰島素通路磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K/AKT)通路障礙及MAPK/ERK通路異常激活導(dǎo)致了卵巢局部胰島素抵抗(Insulin resistance,IR)的發(fā)生。由此推測PCOS患者卵巢局部過度表達(dá)VEGF與IR相關(guān),提示我們可以通過改善PCOS患者IR從而抑制MAPK/ERK通路的異常激活,進(jìn)而減少VEGF的分泌,以改善雙側(cè)卵巢多囊樣改變、排卵障礙、血流信號異常等臨床癥狀及降低卵巢過度刺激征(Ovarian hyperstimulation syndrome,OHSS)發(fā)生率。
【學(xué)位單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R711.75
【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
第一章 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1.1 儀器
        1.1.2 主要試劑及耗材
        1.1.3 研究對象
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.2.1 主要溶液配制及實(shí)驗(yàn)室預(yù)處理
        1.2.2 卵巢黃素化顆粒細(xì)胞的收集培養(yǎng)及觀察
        1.2.3 細(xì)胞蛋白的提取
        1.2.4 Westernblot檢測ERK絲氨酸磷酸化程度、VEGF蛋白表達(dá)
    1.3 統(tǒng)計(jì)分析
第二章 結(jié)果
    2.1 一般資料
    2.2 顆粒細(xì)胞的培養(yǎng)情況
    2.3 Westernblot蛋白印跡法檢測各組ERK絲氨酸磷酸化程度變化、VEGF表達(dá)情況
第三章 討論
    3.1 PCOS與卵巢顆粒細(xì)胞
    3.2 PCOS與卵巢VEGF
    3.3 VEGF與bLH、BT
    3.4 MAPK/ERK信號通路與PCOS-IR
    3.5 MAPK/ERK途徑與PCOS卵巢VEGF
    3.6 問題與展望
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀學(xué)位期間研究成果
致謝

【參考文獻(xiàn)】

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1 陳東思;劉建新;祁秀娟;丁鈺;馬文聰;;IRS-1、ERK2蛋白表達(dá)及其絲氨酸磷酸化程度與PCOS患者胰島素抵抗的關(guān)系[J];中華婦產(chǎn)科雜志;2016年04期

2 陳東思;劉建新;;多囊卵巢綜合征發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展[J];青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2015年06期

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7 陳靜,汪鴻志;血管內(nèi)皮生長因子的研究進(jìn)展[J];中華內(nèi)科雜志;1998年01期

本文編號：2873616