發(fā)布時間：2020-11-06 18:39

　　 研究背景子宮內(nèi)膜樣癌(Endometrial endometrioid carcinoma,EEC)是最常見的惡性婦科腫瘤之一。EEC可以分成不同的子類型并表現(xiàn)出獨特的病理和不同的生物學(xué)行為。而UPF1是無義介導(dǎo)的mRNA降解途徑(NMD)中的關(guān)鍵蛋白因子,在腫瘤中的作用尚待研究。因此本課題希望對UPF1在子宮內(nèi)膜樣癌發(fā)病機制和遷移侵襲的研究,能進一步了解子宮內(nèi)膜樣癌的發(fā)病機制,從而對臨床治療及診斷提供幫助。目的:1.檢測EEC組織及癌旁組織和不同來源的EEC細胞系中UPF1的RNA表達水平;2.驗證UPF1對EEC細胞功能的影響;3.裸鼠皮下成瘤驗證UPF1對成瘤能力的影響;4.探討UPF1影響mTOR信號通路。方法:1.首先采用qRT-PCR檢測人新鮮EEC組織及癌旁組織和EEC細胞株中UPF1的RNA表達水平;2.免疫組織化學(xué)方法檢測EEC組織與癌旁組織中UPF1的表達水平;3.構(gòu)建UPF1過表達質(zhì)粒,瞬時轉(zhuǎn)染促進EEC細胞株(RL952、ishikawa)UPF1的表達;設(shè)計siUPF1抑制EEC細胞株(RL952、ishikawa)中UPF1的表達;4.生物學(xué)功能實驗檢測:通過瞬時轉(zhuǎn)染UPF1過表達質(zhì)粒及siUPF1抑制UPF1表達后,檢測EEC細胞生物學(xué)行為的改變;(1)采用流式細胞術(shù)檢測過表達UPF1及抑制UPF1表達siUPF1后細胞周期及凋亡的情況;(2)采用CCK-8檢測EEC細胞生長曲線的改變;(3)采用細胞劃痕及Transwell遷移與侵襲實驗檢測過表達UPF1及抑制UPF1表達對EEC細胞遷移與侵襲能力的影響;5.Western blot檢測改變EEC細胞株中UPF1表達后對mTOR及下游蛋白(p70s6k/p-p70s6k)表達的影響;6.構(gòu)建細胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株進行裸鼠皮下成瘤實驗;7.統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果:1.qRT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)UPF1在EEC組織中的RNA表達水平較癌旁組織中高表達。2.細胞功能試驗研究表明UPF1可以促進EEC細胞增殖、侵襲遷移的能力,及抑制UPF1表達可以抑制EEC細胞的增殖、侵襲及遷移能力。3.抑制UPF1表達能夠抑制裸鼠皮下成瘤生長速度;4.Western blot結(jié)果顯示UPF1可以通過上調(diào)mTOR,激活mTOR/p70s6k/p-p70s6k信號通路,及通過激活mTOR促進細胞增殖能力。結(jié)論:1.UPF1在EEC組織較癌旁組織中高表達;2.UPF1在EEC中作為促癌基因可以促進EEC細胞的增殖、遷移和侵襲能力,抑制細胞凋亡率;3.在裸鼠實驗中,抑制UPF1的表達可以抑制腫瘤的生長;4.UPF1能使mTOR表達上調(diào)并激活mTOR信號通路促進細胞增殖能力。
【學(xué)位單位】：廣州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R737.33
【部分圖文】：

圖 1.1UPF1 在人子宮內(nèi)膜樣腺癌組織（T）與癌旁正常組織（N）中的表達水平；圖 A、B、C.42 對組織中癌（T）與癌旁（N）UPF1 的表達水平，*p＜0.05,**p 和***p＜0.01；圖 D（20倍鏡）.IHC 檢測 UPF1 在 EEC 中的表達，癌（T）與癌旁（N）對比，UPF1 在癌中的表達明顯高于癌旁正常腺體。1.2UPF1 在子宮內(nèi)膜樣腺癌細胞株中的表達通過 qRT-PCR 及 western blot 檢測在不同 EEC 細胞株中 UPF1 的表達水平，結(jié)果顯示 UPF1 在 ishikawa 中的表達最高，在 RL952、HEC-1B 細胞中的表達較低；結(jié)果如圖 1.2 所示：

圖 1.1UPF1 在人子宮內(nèi)膜樣腺癌組織（T）與癌旁正常組織（N）中的表達水平；圖 A、C.42 對組織中癌（T）與癌旁（N）UPF1 的表達水平，*p＜0.05,**p 和***p＜0.01；圖 D（倍鏡）.IHC 檢測 UPF1 在 EEC 中的表達，癌（T）與癌旁（N）對比，UPF1 在癌中的表明顯高于癌旁正常腺體。1.2UPF1 在子宮內(nèi)膜樣腺癌細胞株中的表達通過 qRT-PCR 及 western blot 檢測在不同 EEC 細胞株中 UPF1 的表達水平結(jié)果顯示 UPF1 在 ishikawa 中的表達最高，在 RL952、HEC-1B 細胞中的表達低；結(jié)果如圖 1.2 所示：

廣州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 2.UPF1 過表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細胞后能有效提高 UPF1 的表達量，siUPF1 能有效抑制UPF1 的表達通過 qRT-PCR 及 western blot 已經(jīng)驗證 UPF1 在 EEC 細胞株 HEC-1B、JEC、ishikawa、RL952 中的表達水平。構(gòu)建好 UPF1 過表達質(zhì)粒，瞬時轉(zhuǎn)染 ishikawa、RL952 細胞株檢測轉(zhuǎn)染效率，與對照組 pcDNA3.1 相比，過表達質(zhì)粒可有效提高UPF1 的表達量，如圖 2A；三組 siUPF1 抑制 UPF1 的表達，分別轉(zhuǎn)染 48h 后ishikawa、RL952 細胞，檢測 siUPF1-1、siUPF1-2 及 siUPF1-3 組的 UPF1 表達量，與 NC 組相比，三種 siRNA 表達有差異，選出抑制效果最佳的 siUPF1-1 進行后續(xù)細胞實驗如圖 2B。A
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本文編號：2873515