目的通過構(gòu)建TGIF（TG-interacting factor,TGIF）穩(wěn)定低表達的非小細胞肺癌細胞株（A549）,觀察沉默TGIF對A549細胞周期分布及Wnt/β-Catenin信號通路的影響,探討TGIF調(diào)控細胞周期的分子機制及對非小細胞肺癌細胞致瘤性的影響,為肺癌的治療提供新的作用靶點。方法1.采用靶向TGIF的慢病毒顆粒和無效干擾對照慢病毒顆粒分別感染A549細胞,構(gòu)建TGIF穩(wěn)定低表達的細胞株（A549-shTGIF）和無效干擾對照細胞株（A549-shcon）,通過蛋白免疫印跡（Western blots）檢測TGIF蛋白表達水平,鑒定TGIF穩(wěn)定低表達的A549細胞株是否構(gòu)建成功。2.利用CASY細胞計數(shù)分析儀分析接種細胞24小時、48小時、72小時、96小時后,A549-shTGIF和A549-shcon細胞增殖的差異。3.通過體外軟瓊脂克隆形成實驗和體內(nèi)裸鼠致瘤實驗,分析TGIF穩(wěn)定低表達細胞與無效干擾對照細胞致瘤性的差異。4.利用流式細胞儀分析TGIF穩(wěn)定低表達組與無效干擾對照組細胞周期分布的差異。5.運用Western blots分析沉默TGIF對A549細... 

【文章來源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

技術(shù)路線圖

tern blots 檢測 shRNA 對靶基因的沉默效率測靶向 TGIF 的慢病毒顆粒和無效對照慢病毒顆粒感染的基因沉默效率，我們用 Western blots 分別檢測兩組慢病毒胞中 TGIF 蛋白的表達水平。如圖 3.1 所示，我們用β-Ac白上樣量的評估，在β-Actin 蛋白表達量一致的情況下，IF 蛋白表達水平要遠低于 A549-shcon 細胞。這說明 TGIF肺癌細胞 A549 細胞株構(gòu)建成功。

圖 3.2 沉默 TGIF 基因?qū)?A549 細胞增殖能力的影響9-shcon 細胞數(shù)相比，同一時點的 A549-shTGIF 細胞數(shù)顯著降TGIF 基因?qū)?A549 細胞體外克隆形成能力的影隆形成實驗結(jié)果顯示，與 A549-shcon 細胞(58.4±4.049-shTGIF 細胞的克隆形成數(shù)量(37.3±2.6)明顯降低(圖(P<0.05)。結(jié)果提示，沉默 TGIF 基因可以降低 A54克隆的能力。

【參考文獻】：
期刊論文
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[2]TGIF對胃癌細胞生長和轉(zhuǎn)移的影響[J]. 胡忠良,文繼舫,肖德勝,鄭暉,傅春燕.  生物化學(xué)與生物物理進展. 2005(09)
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